产品简介:
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是一种基于SST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),SST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜(formazan,参考图1)。SST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
SST-8 formazan
图1:SST-8分子结构及检测原理
本试剂盒提供了一种灵敏度高,操作简便,使用安全的细胞增殖与活性检测方法。与传统的MTT实验相比具有明显的优势:
1.MTT实验生成的甲臜不是水溶性的,需要使用DMSO等有机溶剂溶解;而本方法产生的甲臜是水溶性的,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差。
2.与MTT方法相比,本方法线性范围更宽,灵敏度更高。
3.本方法对细胞无毒性,可以多次测定,选取最佳测定时间。
4.本方法所用试剂在培养基中比MTT更加稳定,实验结果重复性好。
5.MTT具有毒性,同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解,会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒,使用中无需有机溶剂,操作更加安全。
6.本试剂盒在4°C避光可长期保存,使用无需配制,即开即用。
本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测,抗肿瘤药物的筛选,细胞增殖的测定,细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便,试剂盒包含一管已经配制好的含有SST-8的CCK-8溶液,即开即用,无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲臜,可直接使用96孔板或者384孔板在酶标仪上检测,适合大规模,高通量的样品检测。
包装清单:
产品编号 |
规格 |
包装 |
35000 |
100个测试 |
1 mL |
35001 |
500个测试 |
5 mL |
35002 |
1000个测试 |
10 mL |
35003 |
3000个测试 |
30 mL |
35004 |
10000个测试 |
100 mL |
保存条件:
CCK-8溶液在避光,0-5°C的条件下可以保存一年,如长期保存,可在-20°C下避光保存2年,如需经常使用请将试剂存放在0-5°C,为防止背景值增加干扰实验结果,请勿反复冻融。
使用方法(以 96 孔板为例,其他规格培养板按实际情况安排):
1.在96 孔板中配置100μL的细胞悬液(通常细胞增殖实验每孔加入100μL2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100μL5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行培养(在37°C,5% CO2的条件下)预培养24 小时。
2.向培养板加入1-10μL 不同浓度的待测药物刺激。
3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24 或48 小时)。