主要功能为产生性激素,并且与相关的生长因子相互作用促进卵母细胞的发育。齐氏生物科技提供的大鼠卵巢颗粒细胞,采用胶原酶消化制备而来。
1:雌性SD大鼠,每只皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG)40IU,48h后颈椎脱臼法处死。
2:酒精消毒,在无菌条件下迅速剖取卵巢放入预冷的无菌PBS中,去除卵巢周围组织及表面包膜,PBS清洗后置于预冷的DMEM/F12培养基中。
3:在解剖显微镜下用25号针头刺破卵泡,使颗粒细胞释放入DMEM/F12培养基,离心管内吹打分散成单个悬浮细胞。
4:加入0.25%胰蛋白酶与0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)混合消化液,于37℃水浴中消化60min。期间从水浴锅中取出,用吸管反复吹打悬液2~3次。
5:加入含有胎牛血清的培养液终止消化,200目不锈钢细胞筛过滤。1000r/min离心5min,洗涤滤液,弃上清收集细胞。
6:DMEM/F12培养基(含15%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素)重悬细胞,将沉淀制成单细胞悬液。接种于培养瓶中于37℃、5%CO2培养箱中预培养。