翌圣新品大放送--焦磷酸(PPi)荧光检测试剂盒
无机焦磷酸盐(PPi, Inorganic pyrophosphate, diphosphate, pyrophosphoric acid),又称二磷酸盐或双磷酸盐,是许多生化反应形成的产物或所需的底物。在多磷酸盐系列中,PPi是第一个被发现的,在生命科学、环境科学、药物领域和化学过程等方面起着非常重要的作用。
PPi是一种具有重要生物功能的阴离子, 参与生物体中诸多能量转化和新陈代谢过程,ATP水解、DNA和RNA聚合、环AMP形成和脂肪酸的酶促活化以形成它们的CoA酯等酶促反应都能产生PPi。在关节液、血浆以及尿液中有许多PPi来防止钙化,且在细胞外液(ECF)中能够抑制羟基磷灰石的形成,因此在骨代谢、肾结石疾病和某些类型的关节炎的研究中,血浆、血清及生物液体中的PPi含量是一个非常重要的研究指标。
鉴于上述PPi的重要研究价值,其选择性检测已经成为近年来研究热点之一。
目前市场上检测PPi的试剂盒分为两类:比色法和荧光法。
比色法的原理是:无机焦磷酸酶能够催化PPi转化为两分子的磷酸盐。然后,磷酸盐被MESG(2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤核糖核苷)/PNP(嘌呤核苷磷酸化酶)反应消耗,可通过在360 nm波长处的吸光度增加进行检测(图1)。
图1. PPi比色法试剂盒原理图
荧光法是使用独特的PPi荧光感受器(Ex/Em=316/456 nm),其荧光强度与焦磷酸盐浓度成正比。与至少需要两种酶的酶偶联焦磷酸盐(比色法)方法相比,荧光法检测更容易、特异性更强、更可靠,是筛选酶活性或酶抑制剂的理想方法。
❖ PPi高灵敏性!
❖ 适用范围广!
❖ 高稳定性!
❖ 操作快速简单!
该试剂盒已经成功用于高通量筛选(HTS),适用于多种样本,如:尿液、血清、血浆、细胞培养提取物、组织裂解物等。