Q:在测定细胞周期的时候,由于固定、消化等处理后会出现很多细胞碎片,影响测量结果,无法找到G1期细胞群。另外,在测定亚二倍体时,不是那么很清楚的显示出来。
A:方法改进:
在测定细胞周期的时候(以BD公司的Calibur为例),除了设置好获取数据的模版外,另外设置以FL3为横坐标的直方图,测量模式为对数(log),调整放大倍数,使二倍体峰出现在横坐标10*3的位置,就很容易的找到了二倍体峰和细胞周期个时相细胞的分布情况。根据它再调节FL2(线性模式下)的放大 倍数,使二倍体峰在10*2的位置即可。
Q:我要做流式分析细胞周期,我大概收集了10的6次方细胞,但细胞在乙醇固定之后,还看到有细胞沉淀的,但PBS洗涤两次之后,就基本没什么细胞沉淀了,上机发现就发现不了细胞了。这是怎么回事啊?怎么解决这个问题啊?
A:很可能是洗细胞的过程中丢失了,解决办法有:
(1)尽量采用尖底的离心管和水平离心机
(2)离心后尽量用吸管吸取上清,不要倾倒;吸上清时最好残留
(3)离心的转速或时间可稍微增加一点儿
(4)每次加试剂时,吸头最好不要接触液面;混匀时最好不要用吸头吹打,以免吸头挂壁带走部分细胞。