云序提供各类不同修饰的meRIP-qPCR服务,可针对mRNA,lncRNA,环状RNA等不同类型的RNA分子进行检测,低通量验证RNA修饰靶基因表达水平。
05机制互作研究
RIP-seq/qPCR
筛选或验证RNA修饰直接靶点,研究RNA修饰靶基因的调控机制。
RNA pull down -MS/WB
筛选或验证目标RNA互作基因或蛋白,研究相应的分子调控机制。
双荧光素酶实验
验证两基因互作,研究相应的分子调控机制。
ChIP-seq
筛选或验证目标蛋白与DNA互作,研究相应的分子调控机制。
优势一:发表10分以上文章最多的m6A RNA甲基化测序服务平台。云序已累计支持客户发表53+篇高水平文章,合计影响因子460分+,是国内支持发文最多、累计影响因子最高的公司。
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云序客户 RNA 修饰部分文章列表
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ac4C乙酰化测序
o8G RNA氧化测序
比色法/LC-MS检测整体m6A甲基化水平
RNA修饰相关酶PCR芯片
ATAC-seq
ChIP-seq
发表期刊:Cell Death & Disease
发表日期:2021年5月8日
影响因子:8.47
研究方法:m6A MeRIP-seq、RNA-seq、MeRIP-qPCR、RIP、Co-IP 实验等
文章链接:WNT/β-catenin-suppressed FTO expression increases m6A of c-Myc mRNA to promote tumor cell glycolysis and tumorigenesis
一、FTO表达下调可促进肺腺癌(Lung Adenocarcinoma)的生长和转移,FTO 下调越严重,病患的生存率越低
作者首先从 TCGA 的公开数据中发现,肺腺癌组织中的 FTO 表达水平低于邻近的正常组织,然后对 FTO 的 mRNA 进行 qPCR 实验,验证了这种表达差异的存在。免疫组化染色实验也证实 FTO 的的表达水平在肺腺癌组织中要低于邻近的正常组织。Kaplan-Meier 分析显示,低 FTO 表达水平的病患拥有较低的总生存率。
在人类肺腺癌细胞系中对 FTO 的 mRNA 的敲降实验发现,FTO 表达的降低可显著增强细胞的增殖以及非锚定依赖性生长(Anchorage-independed growth)的能力,细胞周期的速度也更快,细胞迁移和侵入性也更强。在体内实验方面,若将 FTO 敲降的细胞系注入无胸腺裸鼠的尾静脉内,相比于注入未敲降细胞的对照组,FTO 敲降的实验组中的肿瘤细胞有明显地向肺部转移。
上述发现都指向一个结论:FTO 在肺腺癌细胞中的下调促进了肿瘤的生长和转移。
二、Wnt 信号通路提高了 FTO 启动子区的组蛋白 H3K27me3 甲基化,从而抑制 FTO 的表达
肺腺癌细胞中的 FTO 的表达是因为什么原因而下调的呢?为了回答这个问题,作者用 PROMO 软件分析 FTO 基因的启动子序列,在其中找到了 3 个有可能是 TBE 元件(LEF/TCF-binding element)的区域。为了验证生信预测的真实性,作者又进行了了一系列分子生物学实验。首先,ChIP 实验证实了 TCF4 与 FTO 启动子的结合。另外,荧光素酶报告基因的结果显示,β-catenin 也可通过结合前述的 3 个 TBE 元件来抑制 FTO 启动子。因此,β-catenin/LEF/TCF 复合体被证明可以抑制 FTO 启动子的活性。人类肺腺癌细胞系经过 Wnt 处理后,FTO 的 mRNA 和蛋白表达水平均有所降低,并且这种现象可通过敲降 β-catenin 来逆转。综合前面的几个发现可以证明:Wnt 在信号通路的上游,通过诱导 β-catenin,使得β-catenin/LEF/TCF 复合体结合到 FTO 启动子上,最终抑制了 FTO 的表达。
那么,Wnt 信号通路到底是怎么抑制 FTO 启动子的呢?作者通过ChIP 实验发现,FTO 基因启动子区域的 TBE 元件区域附近的组蛋白存在 H3K27me3 的甲基化修饰现象。学界在先前的研究中已经知晓,EZH2 是一种负责组蛋白 H3K27me3 甲基化修饰的酶。通过Co-IP 实验发现,Wnt 刺激可以促进 EZH2 与