巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),也称为CSF-1,是一种分泌型细胞因子,它可以影响造血干细胞分化为巨噬细胞或其他相关细胞。 M-CSF是造血生长因子,参与单核细胞,巨噬细胞和骨髓祖细胞的增殖,分化和存活。它还通过吞噬和趋化活性影响巨噬细胞和单核细胞,并增加了肿瘤细胞的细胞毒性。M-CSF的作用不仅限于单核细胞/巨噬细胞,通过与膜受体相互作用(C-fms编码的CSF1R或M-CSF-R原癌基因),M-CSF还可以调节早期造血细胞的增殖,并影响多种免疫、新陈代谢、生育能力和怀孕相关的生理过程。此外,巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSF-R)被确定与M-CSF能交互反应,因此可通过结合酶联免疫吸附测定以检测重组人M-CSF和重组人MCSFR的结合力。
简而言之,将M-CSF在含有0.01%BSA(pH 7.4)的PBS中连续稀释,然后将不同浓度的M-CSF加入包被有M-CSF-R的微孔中,并在37℃孵育2小时。用PBST洗涤孔,并与抗M-CSF的抗体孵育1h,弃去液体并洗净3次。与HRP标记的二抗体孵育后,弃去液体并洗净3次。加入底物液50uL,将微孔板在37℃下孵育15-25分钟。最后,加入50μL中止液并立即在450nm读取。M-CSF和M-CSF-R的结合活性如下图所示:
以上使用的活动蛋白信息为:
巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF):APA090Hu01
巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSF-R):RPB484Hu01
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