概念：TUN EL 技术， 即脱氧核苷酸末端转移酶( Terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT )介导的dUTP 缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL ) 技术， 是原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的新方法， 已广泛用于生物、医学研究领域。

原理

对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让 rTDT 和生物标记的 dTUTP 进入细胞内，在 rTDT 的辅助下 dTUTP 与核断裂的 DNA 3』-OH 结合，再用 HRP 标记的链霉亲和素与 dTUTP 上的 biotin 结合（每个链霉亲和素至少可以再结合 3 个 biotin 分子），最后用 DAB、过氧化氢与 SP 上的辣根过氧化物酶 HRP 发生氧化、环化反应，形成苯乙肼聚合物而呈现棕褐色，最终通过计数每张切片上不同视野中 TUNEL 阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。

实验流程

石蜡切片脱蜡至水→抗原修复→画圈自发荧光淬灭→血清封闭→孵育一抗→孵育二抗→DAPI复染细胞核→抗荧光淬灭封片剂封片→镜检→避光4度保存

注意事项

1、采用石蜡切片制片，取材后应立即放入固定液中，4度运输，避免冻存
2、采用冰冻切片制片应取新鲜组织，-80℃保存，干冰运输