（柱式法）细胞总蛋白提取试剂盒新一代超快速蛋白提取利器

（柱式法）细胞总蛋白提取试剂盒应用：

可用于动物细胞和组织的总蛋白样品制备，适用于 SDS-PAGE,WB 等下游应用

（柱式法）细胞总蛋白提取试剂盒组份：

变性细胞裂解液 25mL

离心管柱 50 个

收集管 50 个

塑料研磨棒 2 根

（柱式法）细胞总蛋白提取试剂盒说明：

动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒，是新一代超快速蛋白质提取工具。越来越多的证据表明最常 用的 RIPA 缓冲液可能导致蛋白质的随机损失，产生很多难以解释的疑难数据。本试剂盒使用离心 管柱提取技术结合优化的裂解缓冲液可以更快速、更有效地提取总蛋白，使 WB 结果更加准确。使 用离心管柱提取蛋白，提取体系最低可以低至 20μL，有效的解决了小样本量的样本。

知识点：

1.蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保存较长时间， 建议添加蛋白酶抑制剂。推荐使用 BCA 试剂盒用于蛋白浓度测定。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制 剂应在使用前加入裂解缓冲液。

2.做 WB 上样前，仍需和 loading buffer 混匀煮制样品。

（柱式法）细胞总蛋白提取试剂盒操作方法：

细胞样品总蛋白提取

A.非贴壁细胞

1.将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷。

2.低速离心收集细胞，在 1.5ml 离心管中加入预冷的 PBS，旋窝震荡,500g 离心 2-3 分钟清洗 细胞。吸去上清，剩余与细胞体积相同体积的 PBS。涡旋震荡重悬细胞。

3.加入表格 1 中相应体积的细胞裂解液，涡旋震荡裂解细胞。（细胞数量和裂解液须保证对应 关系，以达到最佳提取效率）请注意：部分未完全裂解的细胞不会影响样品质量。

4.将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14000-16000g 离心 30 秒取出。

5.立刻将收集管放置于冰上，弃去离心管柱，蛋白提取完成可应用于下游实验。

表 1. 不同细胞体积应加入相应体积裂解液

B.贴壁细胞

1.将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷

2.将预冷的 PBS 直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。

3.按照表 2 中将相应体积的细胞裂解液均匀的加入整个器皿表面，用移液器吹打几次，将裂解 的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14000-16000g 离心 30 秒取出。（如提取浓度不佳，可减少 裂解液使用量）

4.立刻将收集管放置于冰上，弃去离心管柱，蛋白提取完成可应用于下游实验。

表格 2. 不同贴壁细胞量应加入相应体积裂解液

动物组织总蛋白提取

以下步骤是从 15-20mg 组织中提取。如果起始量较大或者较小，需调整相应裂解液的用量比例。

1. 将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷

2. 将 15-20mg 组织放置于离心管柱上，用塑料研磨棒扭转研磨 50-60 次，加入 200μL 细胞裂解液， 继续研磨 30-60 次。（组织用量不要过量，无需过度研磨，裂解液可分两次加入以得到最佳效果） 注意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干。

3.盖上盖子室温孵育 1-2 分钟，14000-16000g 离心 1-2 分钟取出。收集管里的上清是抽提的变 性总蛋白。

请注意：部分未完全裂解的组织不会影响样品质量

常见问题

1、问：裂解物太粘稠，无法用 200-1000µL 吸头吹打？

     答：将细胞裂解物倒入离心管柱中或将吸头剪掉尖端

2、问：离心 30 秒后离心管中还存留细胞裂解液？

     答：减少起始细胞/组织的数量或增加细胞裂解液

3、问：低蛋白浓度？

      答：增加起始细胞/组织的数量或减少细胞裂解液量

4、问高分子量范围（100-300KDa）蛋白条带弱：

     答：增加细胞裂解液确保细胞/组织裂解充分

免费试用：

活动时间：即日起至2020年8月31日

活动对象：仅限高校科研院所等终端科研用户参与

参与限制：免费申请试用装10T,数量100份。送完为止

活动备注：本活动最终解释权归索莱宝公司所有