尿嘧啶切刻酶

产品及特点

本产品在尿嘧啶位置产生一个单核苷酸缺口，它是尿嘧啶 DNA 糖基化酶（UDG）和 DNA 糖基化酶-裂解酶 Endo Ⅷ 的混合物。UDG 催化尿嘧啶碱基的切割，形成一个脱碱基（脱嘧啶）位点，但保持磷酸二酯骨架结构完整。Endo Ⅷ的裂解酶活力使脱碱基位点 3 和 5 端的磷酸二酯键断裂，释放无碱基的脱氧核糖。其反应示意图如下：

它具有下列特点：

1. PCR 产物的克隆

2. 在 DNA 的尿嘧啶处产生缺口

反应条件

PCR 反应缓冲液。37 ℃ 温育。

Buffer 成分

10 mM Tris-HCl，5 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，175 mg/

ml BSA，50% Glycerol，50 mM KCl，pH 7.4 @ 25℃

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37 ℃ 条件下，15 分钟使 10 pmol 的含有单一尿嘧啶碱基的 34bp 寡核苷酸双链产生切刻所需要的酶量。

参考文献

(1) Bitinaite, J. et al. (2007) Nucleic Acids Res., doi:10.1093/NAR/GKM041.

(2) Lindhal, T. et al. (1997) J. Biol. Chem., 252, 3286–3294.

(3) Lindhal, T. (1882) Annu. Rev. Biochem., 51, 61–64.

(4) Melamede, R.J. et al. (1994) Biochemistry, 33,1255–1264.

(5) Jiang, D. et al. (1997) J. Biol. Chem., 272, 32230–32239