本试剂盒利用抗原抗体特异性结合原理开展双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），即通过向预先包被有白细胞介素1β（IL-1β）抗体的微孔中，依次加入待测标本、标准品等试剂和辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase, HRP）标记的检测抗体，经过孵育和洗涤后，用底物TMB显色。TMB在HRP的催化下会变成蓝色，并在酸的作用下最终变成黄色。孵育完成后，用酶标仪在450nm波长下测定溶液吸光度值（OD值），结合标准曲线计算样品浓度。液体颜色的深浅和样品中的目的蛋白或分子含量呈正相关。

灵敏度：1.0 pg/mL

特异性：本试剂盒仅识别牛组织标本中的IL-1β，与其他类似蛋白或分子无明显交叉反应。

注意事项

1. 本试剂盒仅用于牛内源性IL-1β蛋白浓度测定，不可用于其他物种IL-1β含量检测。

2. 所有试剂在使用前应平衡至室温（20-25 ℃），使用完后立即置于2-8 ℃保存。

3. 请按照推荐的温度和时间孵育微孔板，孵育时避免强光直接照射。

4. 操作要认真仔细，确保加入试剂体积和质量的准确性。

5. 建议将待测样品用样本稀释液按一定比例（至少2倍）稀释后再加入酶标板，以减少基质效应对检测结果的影响。在计算样品浓度时，乘以对应稀释比例，即得样品原始浓度。

6. 洗板动作要轻柔，尽量沿孔壁加入液体，切记强力冲洗板底；同时注意吸尽残存液体。

7. 孵育过程中注意防止微孔板液体蒸发，导致“干板”。

8. 在使用酶标仪测量前，注意彻底清除板底残留液体、污渍和指纹，以免影响实验结果。

9. 底物显色液应为无色或浅色，变蓝后不可用于实验检测。

10. 有序存放试剂和标本，避免交叉污染。

11. 不能使用过期或变质产品，不同货号和批次产品不得混合使用。

12. 实验剩余的板条应立即放回自封袋中，密封后低温干燥保存。

13. 在使用本试剂盒时，请注意做好个人防护。

14. 完成检测后，请按照废弃试剂处理要求处置相关样品、试剂及耗材。

样品收集及保存方法

1. 血清：使用血清分离管收集全血标本，室温（约25 ℃）放置2小时或4 ℃冰箱放置过夜， 3000转离心10分钟或1000 g离心20分钟，取上清立即检测，或将上清置于-20 ℃或-80 ℃冰箱保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素抗凝管采集血液标本，在4 ℃条件下3000转离心20分钟或1000 g离心15分钟，取上清立即检测，或将上清置于-20 ℃或-80 ℃冰箱保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：使用预冷的PBS（pH=7.0-7.4）溶液洗涤组织，尽量洗去残存血液（裂解的红细胞会影响测量结果准确性），称重后将组织剪碎，按1:9的质量体积比（即1 g组织加入9 mL溶液）加入PBS溶液（建议加入适量蛋白酶抑制剂），采用玻璃匀浆器充分研磨。后将匀浆液转入离心管中，5000 g离心10分钟，取上清立即检测，或将上清置于-20 ℃或-80 ℃冰箱保存，但应避免反复冻融。

4. 细胞培养上清：吸取细胞培养液，1000 g离心20分钟，取上清立即检测，或将上清置于-20 ℃或-80 ℃冰箱保存，但应避免反复冻融。

5. 其他标本：视具体情况确定，腹腔积液、胸腔积液和关节积液等的收集和存储方法同细胞培养上清。

6. 样品外观：样品在液态时应澄清透明，处理时应尽量通过离心去除悬浮物和漂浮物。

7. 样品保存：样本收集后如在一周内检测，可置于4 ℃保存；若不能及时检测，请按一次使用量进行小份分装，置于-20 ℃（1个月内检测）或-80 ℃（半年内检测）保存，避免反复冻融。