土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒-常用生化试剂-试剂-生物在线

土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒

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产品名称：土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒

英文名称： Neutral Invertase (NI) Assay Kit

产品编号： BC0570

产品价格： 0

产品产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼

品牌商标： solarbio

更新时间： 2023-08-11T10:26:26

使用范围： null

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产品详情

土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒

产品内容：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入30mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存。

试剂三：液体35mL×1瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1支，4℃保存，10mg无水葡萄糖。临用前加入1mL蒸馏水溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准液备用。

产品说明：

蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，将高等植物Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。NI主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
NI催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与3,5－二**水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算NI活性。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒

操作步骤：

一、粗酶液提取：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、标准曲线绘制

将标准品稀释成1.0、0.8、0.6、 0.4、0.2、0mg/mL葡萄糖标准液，按照测定步骤分别测定1.0、0.8、0.6、 0.4、0.2、0mg/mL葡萄糖标准液在540nm下的吸光度（A），以各浓度下吸光值减空白管（浓度为0mg/mL）的吸光度为y轴，葡萄糖浓度为x轴绘制标准曲线。

三、测定步骤及加样表：

按下表操作：

试剂名称（μL）	测定管	对照管	标准管
样本	200	200	-
试剂一	-	800	-
试剂二	800	-	800
标准液	-	-	200
混匀，37℃准确水浴30min后，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变），12000 g，4℃离心5min，取上清。
试剂三	500	500	500

混匀，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，540nm处蒸馏水调零，记录各管吸光值A，ΔA=A测定-A对照。

四、注意事项：

1、如果加入试剂三，煮沸10min后有混浊物出现，建议离心除去沉淀后，取上清测定吸光度；

2、如果吸光值大于1，可以用蒸馏水将样本稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）

土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒

五、N I 活性计算：

标准条件下测定的回归方程为y=kx+b；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

1、按蛋白浓度计算

单位定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

NI活性（U/mg prot）=(x×V1×1000)÷(V1×Cpr)÷T=33.3 ×x÷Cpr

2、按鲜重计算

单位定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

NI活性（U/g）=(x×V1×1000)÷(W×V1÷V2)÷T=33.3 ×x÷W

1000：1 mg/mL =1000μg/mL ；V1：加入反应体系中样本体积，0.2mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T：反应时间：30min。