可溶性淀粉合成酶测定试剂盒 微量法
产品名称: 可溶性淀粉合成酶测定试剂盒 微量法
英文名称: Micro Soluble Starch Synthase(SSS)Assay Kit
产品编号: BC1855
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标: Solarbio
更新时间: 2023-08-11T10:26:26
使用范围: null
- 联系人 : 索莱宝-龚思雨
- 地址 : 北京市通州区中关村科技园区通州园金桥科技产业基地景盛南四街15号85A三层
- 邮编 : 101102
- 所在区域 : 北京
- 电话 : 178****1073 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : 3193328036@qq.com
- 二维码 : 点击查看
可溶性淀粉合成酶测定试剂盒产品内容:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:30mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;
试剂四:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前加入5mL试剂一充分混匀备用;
试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一充分混匀备用;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入500μL双蒸水,充分溶解备用;
试剂七:液体250μL×2支,-20℃保存;
试剂八:液体12.5μL×2支;每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。
反应液Ⅰ的配制:临用前在试剂二中加入14mL试剂一,缓慢加热,逐渐升温使其溶解,冷却后将其加入试剂三混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。
可溶性淀粉合成酶测定试剂盒产品说明:
SSS(EC 2.4.1.21)通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比,340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。
可溶性淀粉合成酶测定试剂盒操作步骤:
一、粗酶液制备
称取约0.1g组织加入1mL提取液,冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称(μL)
测定管
样本
100
反应液Ⅰ
135
混匀,30℃保温20 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却
试剂八
75
混匀,30℃保温30 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却,10000g 常温离心10min,取上清液(如果一次性测定样本较多,可以将试剂四、五和六按比例配成混合液)。37℃预热试剂五和上清液。
上清液
150
试剂五
100
试剂六
5
试剂七
5
混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和2min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。
注意:反应液Ⅰ如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。
三、SSS活性计算
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS(U/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性(U/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V测×109]÷(W÷V提取×VTUNEology 波长可调检测卡盒-->