一步法sgRNA 合成试剂盒

描述：CRISPR/Cas9 是一种由 RNA 指导 Cas 核酸酶对靶向基因进行特定 DNA 修饰的技术，也是细菌和古细菌为应对 噬菌体和外源质粒的攻击而演化来的一种获得性免疫防御机制。此系统的工作原理是通过人工优化的具有引导作用的 sgRNA(Single Guide RNA)引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 sgRNA 配对的靶位点处剪切双链 DNA，引起 DNA 断裂，进而利 用生物体内非同源末端修复机制或同源重组机制修复 DNA，导致基因移码突变、替换或删除，致使基因功能丧失。 sgRNA 的体外合成通常有两种策略：一种为构建含特异性序列的转录质粒，另一种则使用合成的 oligo 退火延伸生 成含 T7 转录启动子的双链 DNA 分子，进而再使用 T7 RNA 聚合酶进行体外转录，从而获得 sgRNA。利用合成的 Oligo 直接制备 sgRNA，具有操作简单快速、可实现高通量等优势，已经成为体外合成 sgRNA 的首选方案。Cas9 的切割是 通过向导 RNA(gRNA)与靶 DNA 形成约 20bp 碱基的配对，且靶序列的 3’端需要有 PAM 结构(NGG)，再引导 Cas9 作 用实现的。本试剂盒可通过一步反应获得高纯度、高产量的 sgRNA，仅需要合成一条含有特定靶标序列的 Oligo，可最 短在 4h 内获得 30~50μg 的 sgRNA。

CRISPR/Cas9是一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，也是细菌和古细菌为应对噬菌体和外源质粒的攻击而演化来的一种获得性免疫防御机制。此系统的工作原理是通过人工优化的具有引导作用的sgRNA (Single Guide RNA)引导核酸酶Cas9蛋白在与sgRNA配对的靶位点处剪切双链DNA，引起DNA断裂，进而利用生物体内非同源末端修复机制或同源重组机制修复DNA，导致基因移码突变、替换或删除，致使基因功能丧失。 sgRNA的体外合成通常有两种策略：一种为构建含特异性序列的转录质粒，另一种则使用合成的oligo退火延伸生成含T7转录启动子的双链DNA分子，进而再使用T7 RNA聚合酶进行体外转录，从而获得sgRNA。利用合成的Oligo直接制备sgRNA，具有操作简单快速、可实现高通量等优势，已经成为体外合成sgRNA的首选方案。Cas9的切割是通过向导RNA(gRNA)与靶DNA形成约20bp碱基的配对，且靶序列的3’端需要有PAM结构(NGG)，再引导Cas9作用实现的。本试剂盒可通过一步反应获得高纯度、高产量的sgRNA，仅需要合成一条含有特定靶标序列的Oligo，可最短在4h内获得30~50μg的sgRNA。

组份

名称 10T 50T 2×sgRNA Reaction Mix 100 μl 500 μl sgRNA Enzyme Mix 100 μl 500 μl 10×Anti sgRNA Oligo(5 μM) 100 μl 500 μl RNase Free DNase I 20 μl 100 μl RNase Free H2O 1 ml 1 ml

原理

储存

-20℃可保存2年，避免反复冻融。

实例

Fig. 应用一步法sgRNA合成试剂盒获得的sgRNA，分别为37℃孵育30min、1h、2h、8h和过夜孵育的sgRNA，孵育时间越长，sgRNA产量越高。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！