产品说明： 
花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素，属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、 叶、花和果实中，使其呈现由红到紫等不同颜色，是植物主要的呈色物质。 采用 pH 示差法测定花色苷含量，当 pH 为 1.0 时花色苷在 530nm 处有最大吸收峰,而当 pH 为 4.5 时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在 530 处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同 pH 下的 530nm 和 700nm 处的吸光度值。pH 示差法减少了溶液 pH 和溶剂差异的影响，排除了其他非花 色苷类物质对检测结果的干扰。 
需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。 
 
操作步骤： 
一、 花色苷的提取： 
按照烘干样品质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 烘干样品，加 入 1mL 提取液），充分匀浆后转移到 EP 管中，提取液定容至 1 mL，盖紧后 4℃浸提 24 h，8000 g， 常温离心 10 min，取上清液待测。 
二、测定步骤： 
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上；试剂一和试剂二预热 10min 以上； 
2、取 20 μL 上清液和 180 μL 试剂一（相当于稀释 10 倍），静置 15min，分别测定 530nm 和 700nm 处的吸光值，分别记为 A1 和 A2。 
3、 取 20 μL 上清液和 180 μL 试剂二（相当于稀释 10 倍），静置 15min，分别测定 530nm 和 700nm 处的吸光值，分别记为 A3 和 A4。 
4、 计算△A=(A1-A2)-(A3-A4) 
注意：如果 A1 大于 1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积 200 μL 不变，如 10 μL 上清液和 190 μL 试剂一（相当于稀释 20 倍）；如果 A1 小于 0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不 变，如 100 μL 上清液和 100 μL 试剂一（相当于稀释 2 倍），使 A1 保持在 0.1~1 范围内，可提高 检测灵敏度；同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入下述公式中
三、花色苷含量计算： 
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 
花色苷含量（μg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×10 6]÷W=16.7×ΔA× F÷W V：提取液体积，1×10 -3L；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10 4 L / mol /cm；d：比色皿光径， 1cm；M：花色苷的相对分子质量：449.2g/mol；F：稀释倍数；10 6：1g=10 6μg；W：样本干重：g。 
b.用 96 孔板测定的计算公式如下 
花色苷含量（μg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×10 6]÷W=33.4×ΔA× F÷W V：提取液体积，1×10 -3L；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10 4 L / mol /cm；d：96 孔板光径， 0.5cm；M：花色苷的相对分子质量：449.2g/mol；F：稀释倍数；10 6：1g=10 6μg；W：样本干重：g。 
注意：最低检测限为 0.2μg /g 干重