人源脱嘌呤/脱嘧啶 (AP) 核酸内切酶

产品及特点

人源脱嘌呤/脱嘧啶 (AP) 核酸内切酶 APE1（Apurinic-ApyrimidinicEndonuclease I），也称为 HAP 1 或 Ref-1，与大肠杆菌外切酶 III 蛋白具有同源性。APE 1水解断裂脱嘌呤/脱嘧啶位点 5 端的磷酸二酯键，产生单链 DNA 断裂，留下3 羟基和 5 脱氧核糖磷酸末端。除具有 AP 核酸内切酶活性外，据报道 APE1还具有弱的 DNA 3 二酯酶、3 到 5 外切酶和 RNase H 活性。除 DNA 修复活性外，APE 1 还能通过一种氧化还原机制，体外调控许多转录因子的 DNA 结合活性。作为这个功能的一部分，APE 1 已被证实能刺激 Fos-Jun 异源二聚体、Jun-Jun同源二聚体、Hela 细胞AP-1 蛋白以及包括 NF-kB、Myb 和 ATF/CREB 家族成员在内的其它几种转录因子的 DNA 结合活性。其反应示意图如下：

具体有下列特点：

1. 单细胞凝胶电泳（彗星试验），彗星试验的推荐稀释倍数1:103 。

2. 碱洗脱

3. 碱解旋

4. 改良切刻翻译

反应条件

1X Buffer [50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg(Ac)2，1 mM DTT (pH7.9 @ 25℃) ]，37℃ 温育。

单位定义

1 单位指在 10 μl 总反应体系中，37℃ 条件下 1 小时，能切割 20 pmol 含一个单独 AP 位点*的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。*AP 位点的创建方法如下：37 ℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG）处理 20pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。

Buffer 成分

10 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，1 mM DTT，0.05 mM EDTA，200 μg/mlBSA，50% Glycerol，pH 8.0 @ 25℃

热失活

65℃ 20 分钟。