产品内容：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入20mL蒸馏水充分溶解。
 
产品说明：
    糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。
糜蛋白酶催化ATEE水解，产物在237nm有特征光吸收；通过测定237nm光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶活性。
试验所需自备仪器和样品：
台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV 板)、冰和蒸馏水。
 
操作步骤：
一、粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（ml）1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清即粗酶液。
二、测定：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到237nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中保温30min。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μL试剂一，200μL试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为△A 空白管。（从吸光值稳定增加开始计时）
4. 测定管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μL 粗酶液，200μL试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为△A测定管。（从吸光值稳定增加开始计时）
注意：空白管只需要测定一次。
 
 
三、糜蛋白酶活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶（U/mg prot）= (△A 测定管－△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T
=2.75×(△A 测定管－△A 空白管)÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶（U/g）=(△A 测定管－△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T
=2.75×(△A 测定管－△A 空白管)÷W
    W：样品质量（g）；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），20μL=2×10-2 mL；V2：粗酶液总体积（mL），1 mL；V 反总：反应总体积，220μL=0.22mL； T：反应时间（min），4min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶（U/mg prot）= (△A 测定管－△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T
=2.75×(△A 测定管－△A 空白管)÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶（U/g）=(△A 测定管－△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T
=2.75×(△A 测定管－△A 空白管)÷W
    W：样品质量（g）；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），20μL=2×10-2 mL；V2：粗酶液总体积（mL），TUNEology 波长可调检测卡盒-->