本产品提供非变性PAGE凝胶制备以及电泳试剂。用于制备非变性PAGE电泳凝胶制备和电泳实验。

操作步骤：

    根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

一、灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表3）

1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。

2．将不同体积的30% Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。

3．加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于 mini- gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端 1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。

5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

注意：凝胶的聚合时间和环境温度有关。冬季室温低，聚合时间会延长，可以增加APS的用量来减少凝胶时间。

二、灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表2）

1．去除覆盖在分离胶上的水层。

2．将不同体积的30% Acr-Bis（29:1）、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混合。

3．加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6．静置30~60分钟，等待浓缩胶聚合。

7．待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

8．进行常规电泳操作。

注意事项：

1. APS溶液不稳定，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换10% APS。

2. PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作。

3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。