考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书
产品名称： 考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书
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产品产地： 北京/中国
品牌商标： 索莱宝
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北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
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考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书(50T/48S)
产品简介：
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在595nm 处有最大吸收峰，
其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。
试验中所需的仪器和试剂：
酶标仪、酶标板、移液器和蒸馏水。
产品内容：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体×1 瓶，4℃保存。
操作步骤：
一、样品中可溶性蛋白质提取：
液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。
组织样品：准确称取约0.1 g样品，加1mL提取液（自备，根据需要可以是酶提取缓冲液或者蒸馏水或
者生理盐水），冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）
二、吸光值测定：
1. 分光光度计仪预热30 min 以上，调节波长到595nm，蒸馏水调零。
2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂一，混匀后室温静置10min，于595nm
测定吸光度，10~20min 内完成测定，记为A 空白管。
3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL标准液，1000μL试剂一，混匀后室温静置10min，于595nm
测定吸光度，10~20min 内完成测定，记为A 标准管。
4. 测定管：取 1mL 玻璃比色皿板，加入 200μL 待测液，1000μL 试剂一，混匀后室温静置 10min，于
595nm 测定吸光度，10~20min 内完成测定，记为A 测定管。
蛋⽩质含量计算：
C 待测（g/m L）= C 标准管×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)
=50×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)
C 标准管：标准品蛋白质浓度，50μg/mL。
注意事项：
1．加考马斯亮蓝后，在10~20min 内吸光值相对较稳定，因此须在10~20min 完成比色。
2．不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，测完成后立即用95%乙醇冲洗。
3．测定前用1~2 个样做预实验，确保蛋白浓度在0~100g/ml 范围内，否则需要做相应稀释。
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