MethylAffinity™ Methylated DNA Enrichment Kit

DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育等过程中起着极其重要的作用。在正常的哺乳动物基因组中，CpG岛中的CpG位点通常处于非甲基化状态，而在CpG岛外的CpG位点则通常是甲基化的。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。

本试剂盒利用经改造的GCM™重组MBD（methyl binding domain）蛋白对CpG甲基化位点的高亲和性从基因组中快速纯化CpG甲基化DN**段，每次反应可以处理1~1000ng 基因组DNA。纯化后的CpG甲基化DN**段结合RT-PCR及重亚硫酸盐处理法，可用于基因组甲基化水平分析及甲基化位点分析。同时，结合NaCl梯度洗脱，可以分离具有不同CpG甲基化密度的DN**段。

产品名称	产品描述	产品货号	价 格	说明书
MethylAffinity™ Methylated DNA Enrichment Kit	采用MBD层析法，用于从整个基因组中快速纯化富含甲基化CpG的双链DN**段	MAK-GCM-30	￥3,980

工作原理：

产品特征及优点：

• 步骤简单，反应时间短：固定化的GCM™重组MBD蛋白，无需再进行填料-MBD的固定化反应；可结合双链CpG甲基化DNA，样品基因组DNA无需变性；Elution buffer可快速洗脱产物，无需蛋白酶处理，洗脱产物可立即用于RT-PCR等下游检测，反应耗时少于2小时
• 灵敏度高，亲和力强：可处理纳克级的基因组DNA；采用重组MBD蛋白，具有更高的CpG甲基化位点亲和力
• 可分离具有不同甲基化程度的DNA：结合NaCl梯度洗脱，GCM™-Bead能分离具有两个以上不同CpG位点密度的DN**段
• 更易操作：GCM™-Bead具有鲜艳的红色，比传统的sepharose Bead更有效地避免清洗过程中的损失

图1. 50~0.5ng 小鼠基因组DNA 经MethylAffinity™ Methylated DNA Enrichment Kit纯化后，以洗脱产物为模板，对CpG阳性及阴性基因进行PCR扩增（35个循环）。GAPDH Promoter primer（negative control）PCR结果为阴性， IAP Promoter primer（positive control）PCR在小鼠基因组DNA 加入量低至1ng仍可得到阳性结果

图2. 100ng小鼠基因组DNA与5µlGCM™-Bead室温结合 1小时，经binding buffer 清洗4次，最后用Elution buffer 洗脱甲基化DNA。收集结合后上清物（Wash）及洗脱物（Elution）， 用小鼠β-acting Promoter primer（甲基化阴性对照）、小鼠 GAPDH Promoter primer（甲基化阴性对照）及小鼠IAP primer （甲基化阳性对照）进行PCR检测。β-acting Promoter primer 及GAPDH Promoter primer扩增带只出现在结合后上清物中， 而IAP primer的扩增带则出现在洗脱物中。	图3. 左边为sepharose，右边为GCM™-Bead。与传统sepharose Bead相比，GCM™-Bead更加容易辨认，在清洗过程中有效避免损失。