T4 RNA连接酶 1

产品及特点

催化 3→5 磷酸二酯键的形成，使核苷酸的5 -磷酸末端和 3-羟基末端连接。伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi 作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸。

具体有下列特点：

1. 连接单链 RNA 和 DNA

2. 用 5 -[32P] pCp 进行 RNA 3 末端标记

3. RNA 和 DNA 分子内及分子间的连接

4. 合成单链寡脱氧核苷酸

5. 蛋白质中掺入非天然氨基酸

6. 无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶污染。

活性单位定义

1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内将 1 nmol 的 5 -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。

反应条件

1X T4 RNA 连接酶缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃) ，10 mMMgCl2，1 mM DTT 1mM ATP]，37℃ 温育。

注意事项

pCp 的连接需要加入终浓度为 10%（v/v）的 DMSO。

热失活

65℃ 15 分钟或煮沸 2 分钟。

参考文献

(1) England, T., Gumport, R. and Uhlenbeck, O.(1977) Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 74, 4839–4842.

(2) England, T. and Uhlenbeck, O. (1978) Nature, 275,560–562.

(3) Romaniuk, P. and Uhlenbeck, O. (1983). In R. Wu,L. Grossman andK. Moldave (Eds.), Methods in Enzymology Vol. 100, (pp. 52–56). NewYork:Academic Press.

(4) Moore, M.J. and Sharp, P.A. (1992) Science,256, 992–997.

(5) Tessier, D.C., Brousseau, R. and Vernet, T. (1986) Anal.Biochem., 158,171–178.

(6) Noren, C.J. et al. (1989) Science, 244, 182–188.