【产品名称】

通用名称：禽白血病病毒检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Leukemia of Fowls virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】 25T/盒 & 50T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于禽白血病病毒检测，可用于临床禽白血病病毒感染的辅助诊断，但不作确诊使用。

【检验原理】

本试剂盒针对引起禽白血病的禽C型反录病毒群的病毒基因组高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含禽C型反录病毒群的病毒基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】

注：阴性对照为禽基因组DNA，阳性对照为失去活性的禽白血病病毒cDNA。

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1.血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样品置于离心管中待检。

2.肌肉或内脏样品：取少量样品（2～3克）于研钵或匀浆器中研磨，然后将研磨匀浆转入无菌离心管中，3000rpm/min 离心10分钟取上清待检。

3.粪便标本：采集1-10g粪便（或用塑料杆人造纤维头的肛拭子两支）放入含有10 ml PBS或生理盐水无菌的50ml有螺旋盖的塑料瓶内，密封，4℃条件下立即送至有关实验室。

4.样本采集后应立即检测，若不能立即检测，应置于-80℃冷冻保存，避免反复冻融，用干冰或液氮运输。

【检验方法】

【检验方法】

1. 试剂准备（试剂准备区）

（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数

 (3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

2.样本准备（样本处理区）

用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

 在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。

4. PCR（PCR扩增区）

（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。

（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。