Heparin Sepharose 6FF的重力柱

货号：YA2490

规格：1x1mL/1x5mL/5x1mL/3x1mL+1x5mL/5x5mL

保存：2°C - 8°C

产品介绍

肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖，将它偶联到活化的琼脂糖凝胶上，该填料具有很高的物理化学稳定性。肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合，所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质的纯化。肝素琼脂糖凝胶用于抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的分离纯化。

产品性能（仅供参考）

特点	基团脱落少，结合特异性强
基质	6%的琼脂糖凝胶
配基	肝素
吸附载量	2-3mg 抗凝血因子Ⅲ（AT Ⅲ ）/ml
亲和填料的颗粒大小	45-165μm
最大流速	300cm/h
pH范围	4-10，在位清洗时pH范围可到3-13
使用温度	4℃~常温
保存温度	4~8℃
保存液体	20%乙醇

基本操作信息（仅供参考）

1 缓冲液的准备：

平衡/洗杂液: 10-100mM Tris-HCl，10mM 柠檬酸钠，pH7.4

洗脱液: 10-100mM Tris-HCl，10mM 柠檬酸钠，1M NaCl，pH7.4

2 样品准备：

样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3 样品纯化：

Heparin Beads 6FF 重力柱使用请参考以下说明，各溶液用量均按照柱体积计算（例如：2 个柱体积，1ml 规格对应为 2ml 溶液，5ml 规格对应为 10ml 溶液）。整个纯化流程大约需要 30min（主要取决于样品体积和溶液的粘稠性），操作快捷。使用流程请参考下图。

Step 1：柱子平衡；Step 2：上样；Step 3：洗杂；Step 4：洗脱

1）将 Heparin Beads 6FF 重力柱固定在铁架台上，依次去掉下端塞和上端塞，流干重力柱的保护液。

2）向柱管中加入5个柱体积的平衡液，进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

3）将样品加到平衡好的重力柱中，样品保留时间至少 2min，保证目的蛋白与介质充分接触，提高目的蛋白的回收率。收集流出液，用于 SDS-PAGE 分析蛋白质的结合情况，在出现问题时，更方便寻找解决问题的方案。

4）用 10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

5）使用 5-10 倍柱体积的洗脱液进行目的蛋白的洗脱，分段收集，每一个柱体积收集一管，分别检测，既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱，又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。

6）依次使用 3 倍柱体积的平衡液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料。将重力柱保存在等体积的 20%乙醇中，置于 2-8°C 保存，防止填料被细菌污染。

4 SDS-PAGE 检测

将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。

5 填料清洗

Heparin Beads 6FF 纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法

用 2 倍柱体积的 0.1M NaOH 或 6M 盐酸胍或 8M 尿素溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% TritonX-100 清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

去除一些离子键结合物质

用 3-4 倍柱体积的 2M NaCl 清洗，然后立即用5倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。