蛋白表达与纯化技术服务

步骤1. 目标基因全基因合成：

1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化。
3. 合成设计好的基因序列。

提供给客户：目标基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。

时间：2~3周，根据基因的大小而定.
步骤2. 目标基因亚克隆：

1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。

提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
时间：1-2周

步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选：

1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
3. 挑选阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
5. 可提供表达菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami等。

提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。

步骤4. 目标蛋白表达及纯化：

1. 摇瓶培养1L重组细菌，诱导表达目标蛋白。
2. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

提供给客户：纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。如需增量可咨询销售人员。

本公司可为客户提供全面的生物学服务平台，主要有：
1）基因合成服务：引物设计合成，密码子优化，DNA测序 , TA克隆

2) RNAi 服务，RNAi 载体构建、RNAi 导入优化和干扰评价

3) 蛋白表达与纯化服务，包括哺乳动物、细菌、酵母和病毒表达

4) 多克隆抗体制备和纯化：公司拥有cDNA文库

5) 基因表达分析服务，实时定量PCR ，Western Blot，探针设计合成

6) 克隆服务，包括TA克隆、PCR 克隆和亚克隆、基因突变、载体设计和病毒构建包装等专业服务

7）多肽合成：

8）细胞转染：包括细胞培养，MTT检测，瞬时稳定转染