细胞周期-PI染色

      细胞周期(cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。细胞周期反应了细胞增殖速度。PI(碘化丙锭):可以与细胞内DNA和RNA结合，采用RNA酶将RNA消化后，通过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。

      细胞周期各时相的DNA含量不同： 

            G0/G1期具有二倍体细胞的DNA含量(2N)；

            G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N)；

            S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间(2N-4N)。

实验步骤：

DAY1

      制备单细胞悬液，加到六孔板，10x104 cells/孔

DAY2

      加药处理12小时，每组3复孔

DAY3

      收集细胞，用预冷的PBS洗一次；

      预冷的70%乙醇（PBS配制）重悬，放在4 度固定过夜（可以放在-20长期保存）。

DAY4

      配制染色液；

      固定好的细胞1000g离心5min；

      预冷的PBS洗一次；

      染色液重悬细胞，37℃孵育 30min；

      4 度保存，当日流式检测，488nm激发波长。