产品内容： 
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。 
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。 
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5mL 试剂二，混匀。 
标准品：粉剂×1 瓶（棕色），4℃保存。临用前配制，加入 5.679 mL 蒸馏水充分溶解；吸取 0.1 mL 上述溶液，加入 0.9 mL 蒸馏水，混匀，即 100μmol/L AsA。 
 
产品说明: 
AsA 又称维生素 c。AsA 是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合 成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的 作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。 抗坏血酸氧化酶（AAO）催化 AsA 氧化生成 DHA，通过测定 AsA 的氧化速率，即可计算出 AsA 含量。 
自备仪器和用品： 研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。 
 
操作步骤： 
一、 样品中 AsA 提取： 
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加 入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。 
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万 细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）； 8000g，4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。 
3. 血清等液体：直接测定。
 
二、 AsA 测定操作： 
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 265 nm，蒸馏水调零。 
2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。 
3. 标准管：依次在比色皿中加入 100μL 标准液、800μL 试剂二和 100μL 试剂三，迅速混匀，在 265nm 测定，记录 30s 和 150s 的吸光值 A1 和 A2，△A 标准管= A1 －A2。 
4. 测定管：依次在比色皿中加入 100μL 上清液、800μL 试剂二和 100μL 试剂三，迅速混匀，在 265nm 测定，记录 30 s 和 150s 的吸光值 A3 和 A4，△A 测定管= A3 －A4。 注意：标准管只需测定一次。
 
三、 AsA 含量计算公式: 
(1) 按蛋白浓度计算 
AsA (nmol/mg prot) =[C 标准液×△A 测定管÷△A 标准管×V 标准]÷（Cpr×V 样） =100×△A 测定管÷△A 标准管÷Cpr 
(2) 按样本质量计算 
AsA(nmol/g) =[C 标准液×△A 测定管÷△A 标准管×V 标准]÷(W×V 样÷V 样总) =100×△A 测定管÷△A 标准管÷W 
(3) 按细胞数量计算 
AsA(nmol/10 4 cell) =[C 标准液×△A 测定管÷△A 标准管×V 标准]÷(细胞数量×V 样÷V 样总) =100×△A 测定管÷△A 标准管÷细胞数量 
（4）按液体体积计算 
AsA (nmol/mL) =[C 标准液×△A 测定管÷△A 标准管×V 标准]÷V 样 =100×△A 测定管÷△A 标准管 C 标准液：100μmol/L；V 标准：标准液体积，0.1mL；V 样总：上清液总体积，1.0 mL=0.001 L；V 样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL；Cpr ：蛋白含量，mg/mL；W：样品质量，g。
 注意事项： 
1. 试剂三和标准品现配现用，配制好的 4℃保存，3 天内使用完。 
2. 最低检出限为 10μ mol/L。

相关文献：
《Effect of 1α, 25-dihydroxyvitamin D3 on the osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells and the underlying regulatory mechanism》 作者:Yawen Ji， Panpan Zhang， Yixiao Xing， Linglu Jia， Yunpeng Zhang， Tingting Jia， Xuan Wu， Bin Zhao， Xin Xu 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影响因子:2.928 PMID:30365053