大片段测序

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服务概述

BAC克隆等大片段DNA测序已在国内外全基因组测序和功能基因筛选中得到广泛应用，但因为涉及高质量的shotgun文库构建和大规模、高通量测序平台的建立，目前国内除参加过人类基因组计划的研究机构外，还鲜有专业测序公司能提供此类专业服务。我公司以自身强劲的研发实力和DNA测序平台的规模化，已形成构建BAC克隆的shotgun亚克隆文库的成熟技术平台，并建立起大规模DNA测序和数据处理的完整体系，为高等院校、科研院所提供大片段DNA测序的技术服务。

样品要求

由客户提供BAC克隆的平板或不少于200μl的菌液，或目的DNA 5 ~ 20μg，并提供插入片段来源、长度和尽可能详细的载体背景资料。

服务流程

1. 提取高纯度的BAC质粒DNA；

2. 通过BAC质粒DNA末端测序进行BAC克隆的鉴定；

3. 对BAC质粒DNA用物理方法 (超声波法或剪切法) 进行随机切断处理，然后用T4 DNA Polymerase对小片段 DNA进行末端平滑化；

4. 回收1.6 ~ 3 Kb的小片段DNA；

5. 酶切载体并用CIP脱磷酸化处理；

6. 连接，转化，获得shotgun亚克隆文库，测定库容量；

7. 从文库中随机挑取阳性克隆进行测序，应该进行的DNA测序量以DNA片段实际长度的6 ~ 10倍量覆盖率进行计算；

8. 对测序数据进行编辑，将相互重叠的读出序列组装成连续的最小重叠群（contig）；

9. 通过primer walking测序，进行整体DNA序列的补缺工作，最终得到目的片段的全部序列；

10. 选取适当的限制性内切酶酶切BAC质粒DNA以获得酶切图谱, 与组装后序列的酶切位点分析结果比较, 以验证组装的准确性。

完成时间：

根据片段大小而定

最终产品

测序峰图、数据拼接

服务费用

询价，包括：文库构建费用，DNA测序费用，补缺费用(包括引物设计合成，测序费，数据拼接等)。