使用方法

2.1、磁珠的准备

使用前，需要洗去磁珠上面的防腐剂。具体步骤如下：

（1）使用前将磁珠充分混匀，根据需要，吸取适当量磁珠悬浮液到EP管中，将EP管放在磁力架上，磁分离1-2 min，吸弃上清。

（2）取下EP管，加入与磁珠悬浮液等体积的清洗液，点震或漩涡振荡使磁珠充分悬浮于清洗液中，将EP管置于磁力架上，磁分离1-2 min，吸弃上清。

（3）重复（2）一次。

注：①如果下游是用于核酸类的操作清洗液用（1×B&W 缓冲液）；②如果下游是用于蛋白类的操作清洗液用（PBS，pH=7.4）。后续的各种操作均需要清洗磁珠表面的防腐剂，清洗完毕后根据实验所需选择下列不同的程序。

2.2、固定程序

2.2.1 核酸

（1）对RNA 操作的准备

    因为本产品没有对RNA 酶进行处理，如果后续试验进行RNA的操作，用与磁珠悬浮液等体积溶液A 洗磁珠两次，1－3 分钟；然后用与磁珠悬浮液等体积的溶液B 洗磁珠一次。

（2）用2×B&W 缓冲液悬浮经过上述磁珠，使终浓度为5 μg/μl，或实验应用的适宜浓度。

（3）加入与磁珠悬浮液等体积的生物素化DNA/RNA 水溶液。DNA/RNA的具体用量根据实验所需确定。

（4）室温下放置，轻轻旋转或时而轻敲离心管混合。孵育时间依赖结合的核酸长度：短的寡核苷酸（小于30 个碱基）需要的孵育时间不超过10 min。30 碱基至1kb 的孵育时间为15 min。

（5）磁珠此时被覆了生物素化的DNA/RNA 片段，用磁力架分离磁珠。将离心管放在磁力架上1到2 min。

（6）用1×B&W 缓冲液洗2-3 次，用磁力架吸附磁珠以利于洗涤。

（7）悬浮磁珠，稀释至所需浓度。此时磁珠已结合了经固定化后的DNA/RNA 片段，应用低盐浓度缓冲液悬浮磁珠，以利于下面的操作。

注：如果是对DNA的操作则省去2.2.1中步骤（1）。

2.2.2 抗体

（1）计算磁珠和生物素化抗体所需用量。每mg 链霉亲和素磁珠需要大约5-10μg 抗体。假定抗体100％ 生物素化，此时链霉亲和素饱和。

（2）在EP管中加入一定量的PBS缓冲液、磁珠以及生物素化抗体，在室温下孵育（使磁珠在溶液中保持悬浮状态，但不能剧烈振荡）30 min，将EP管置于磁力架上，磁分离1-2 min，吸弃上清。

（3）用PBS/BSA 洗涤磁珠4-5 次，用磁力架辅助。

（4）悬浮磁珠稀释至所需浓度。

2.2.3 生物素化小分子

链霉亲和磁珠还可用于固定诸如小分子、肽类等生物素化配体。生物素化配体与磁珠结合能力依赖于磁珠与配体之间、及配体与配体之间的空间构型、及电荷相互作用。磁珠表面每个链霉亲和素有3-4 个结合位点。每mg 磁珠大约加入1000 pmoles 的生物素化小分子即可达到饱和，充分混合15-30 min。分子的大小决定实验中其需加入的浓度。在结合过程中，磁珠的浓度应在10-50 mg/ml。应用磁力架洗涤已被覆抗体的磁珠3-4 次，去除未结合物质。结合缓冲液的盐浓度和pH 值依据固化分子类型不同而不同。固化后的分子根据下游实验不同而选择合适的缓冲液。磁珠与固化分子的复合物在共用缓冲液中性能稳定。

2.3、生物素化分子的释放

生物素和链霉亲和素之间化学键的断裂需要严格条件。例如，将复合物置入pH=8.2、含95％甲酰氨的10 mM EDTA 中65 °C 孵育5 min 或90 °C 孵育2 min，超过96% 生物素化DNA 片段均可被特异地分离。另一种方法，可将与磁珠相连的固化靶分子置于0.1% SDS 中煮沸5 min。

2.4、溶液的配制

（1）2倍B&W 缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH 7.5)、1 mM EDTA、2.0 M NaCl。

（2）溶液A：DEPC 处理的0.1 M NaOH；DEPC 处理的0.05 M NaCl

溶液B：DEPC 处理的0.1 M NaCl。

溶液A 与溶液B 的DEPC 处理过程：

向溶液A 和溶液B 中分别加入DEPC，使DEPC的终浓度达0.1%，用力震荡。室温放置1 小时，高压灭菌。

（3）PBS缓冲溶液：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 10mmol/L， KH2PO4 2mmol/L调节pH=7.4。

（4）PBS/BSA缓冲溶液：PBS/BSA (PBS, pH 7.4 含有0.1% (w/v) BSA)。

2.5、贮存与稳定性

密闭2-8 °C保存，在有效期内磁珠稳定，有效期标注在标签上。磁珠小瓶要竖直存放，以保证磁珠呈悬浮液，磁珠烘干会导致其性能下降。此产品不能冷冻。用前要充分悬浮磁珠链霉亲和素磁珠悬浮液未经核糖核酸酶灭活。要防止细菌污染磁珠。