产品内容：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存； 
工作液：24mL×1 瓶，4℃保存；
 
产品说明： 
CAT(EC1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的 H2O2清除酶，在活 性氧清除系统中具有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解 H2O2，使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时 间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。
 
操作步骤： 
一、粗酶液提取：
1、 细菌、细胞或组织样品的制备 收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1ML 提取液，超声波破碎细菌或 细胞（功率 20%或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒。重复 30 次）；8000g4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。 
2、 血清（浆）样品：直接检测。
二、操作步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min，调节波长到 240nm，蒸馏水调零。 
2、 测定前将 CAT 检测工作液 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）水浴 10min。
3、 加入 10μL 样本和 190μL 工作液，混匀 5s 或者在酶标仪上振动 5s 并立即计时，记录 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA=A1-A2
三、CAT 活性计算（用石英比色皿）：
1、 血清（浆）CAT 活力的计算: 单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 
CAT（U/mL）＝反应总体积÷样本体积÷反应时间÷H2O2消光系数（43.6×10-3）×ΔA=459×ΔA 
2、 组织 CAT 活力计算： 
（1） 按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CAT（U/mg prot）＝反应总体积÷样本体积÷反应时间÷H2O2消光系数（43.6×10-3）×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL） =459×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL）
（2） 按样本鲜重计算： 单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 
CAT（U/g mass）＝反应总体积÷样本体积÷反应时间÷H2O2 消光系数（4.36×104）×ΔA÷样本鲜重（g/mL） =459×ΔA÷样本鲜重（g/mL） 
3、 细菌或细胞中 CAT 活力计算： 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 
CAT（U/104 cell）＝反应总体积÷样本体积÷反应时间÷H2O2消光系数（4.36×104）×ΔA÷细胞密度（104 cell/mL） =0.917×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε: NADH 摩尔吸光系数，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0.01ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，1min。W，样本质量，g；Cpr： 上清液蛋白浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总数，500 万。
 
CAT 活性计算（用 96 孔板）：
1、 血清（浆）CAT 活力的计算: 单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CAT（U/mL）＝反应总体积÷样本体积÷反应时间÷H2O2消光系数（4.36×104）×ΔA=918×ΔA
2、 组织 CAT 活力计算： 
（1） 按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CAT（U/mgprot）＝反应总体积÷样本体积÷反应时间÷H2O2消光系数（4.36×104）×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL） =918×ΔA÷蛋白质浓度（mg/mL） 
（2） 按样本鲜重计算： 单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CAT（U/g mass）＝反应总体积÷样本体积÷反应时间÷H2O2 消光系数（4.36×104）×ΔA÷样本鲜重（g/mL） =918×ΔA÷样本鲜重（g/mL） 
3、 细菌或细胞中 CAT 活力计算： 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CAT（U/104 cell）＝反应总体积÷样本体积÷反应时间÷H2O2消光系数（4.36×104）×ΔA÷细胞密度（104 cell/mL） =1.836×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε: NADH 摩尔吸光系数，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm； V 样：加入样本体积，0.01ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，1min。W，样本质量，g；Cpr： 上清液蛋白浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总数，500 万。
 
注意事项
1、 预实验如果发现酶活性过高（其实 OD 值过大），可用提取液适当稀释样品。 
2、 如果酶活性过低，延长反应时间（3 分钟之内），并将反应时间准确代入计算公式。
 
相关文献：
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