操作步骤：提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化，震荡混匀。

1)    每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响）；

2)    每个反应管分别加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物浓度10 μM，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中）；

3)    向反应管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为14.1 μL）;

4)    最后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（对于多个反应，建议将B buffer加至反应管的盖子内侧，上下颠倒反应管8-10次混匀）；

5)    混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中42 oC孵育30 mins；

6)    反应结束后，加入50 μL酚/氯仿，1:1抽提反应液，12000 rpm离心5 mins，取5 μL上清进行电泳检测。（或者使用DNA产物纯化试剂盒处理反应液后进行电泳检测）

体系配制

注意事项：

1．  由于试剂盒灵敏度非常高，在进行反应时请注意避免微量核酸染，并尽量考虑设置空白对照以确认是否有核酸污染。

2．  试剂盒保质期12个月。每次使用时，请取出实验所需的MIRA反应单元的数量，置于冰浴条件下并在8小时内使用；剩余部分，请置于存储条件下。

相关产品：