蛋白组学,临床多肽标志物筛选技术/蛋白质非标记定量技术(Label-Free shotgun)/iTraq/TMT标记技术
产品名称: 蛋白组学,临床多肽标志物筛选技术/蛋白质非标记定量技术(Label-Free shotgun)/iTraq/TMT标记技术
英文名称: Proteomics
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Q Exactive™质谱仪具有创新的HR/AM Quanfirmation™功能,能够在单次分析中鉴定、定量和确认复杂混合物中更多痕量级的代谢物、肽类和蛋白质。与其它技术不同的是,该系统能够在不影响MS/MS灵敏度、质量分辨率或定量重现性的情况下,获得极其可靠的分析结果。
毅新博创依托Q Exactive质谱平台,为用户提供蛋白质非标记(Label free shotgun)、定量蛋白质鉴定、TMT/iTRAQ标记定量蛋白质鉴定、多肽混合物鉴定等专业技术服务。
检测流程
临床应用
第二阶段将大量样本验证过的诊断模型申报临床诊断试剂盒
第六阶段将制作的单抗开发成诊断模型申报临床诊断试剂盒
发表文章举例
定量蛋白质组学(Quantitative Proteomics)是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白,结合生物信息学揭示细胞生理病理功能,同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。随着蛋白质组学研究的不断深入,对于复杂生命现象的研究必然要求蛋白质组学能够揭示蛋白质的动态变化。这其中就包括了蛋白质在不同状态、环境和处理等情况下表达量的变化,而质谱技术的飞速发展为定量蛋白质组学的研究提供了技术保障。
Label-free shotgun:无标签标记的定量蛋白质组学研究,依赖于繁杂的信息分析完成定量过程,主要有两种:信号强度和谱图计数法[1]。前者根据一级质谱相关的肽段峰强度(Mass spectral peak intensity)、峰面积(Peak area)、液相色谱保留时间(LC retention time)等信息进行定量分析;后者根据二级质谱相关的每个蛋白鉴定到的肽段总次数(Peptide hide或Spectral counts)、所鉴定肽段的离子价位(Ion counts of identified peptides)等信息进行定量分析。
技术特点
无标记:克服标记样本的局限性,可研究大规模样本
数据要求高:基于高实验重复性,得到准确结果
定量方法:基于信息分析进行差异蛋白定量
数据量大:信息分析要求高
iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。
TMT标记 同量异序化学标签是通过串联质谱对不同样品中的蛋白进行同时鉴定和定量的有力工具。这些标签是具有相同结构的小化学分子,这些标签能够共价地结合在蛋白和 多肽的赖氨酸残基的游离氨基末端,因此能够标记样品中的多种多肽。在MS/MS分析中,每个同量异序标签都能够产生一个独特的离子图谱,因此可以利用该标 签进行定量。在第一次MS分析中,标记的多肽是无法彼此区分出来的;然而,在串联MS 模式下,多肽会被分离并片段化,每个标签都会产生一个独特的报告离子。通过比较MS/MS图谱中的六个报告离子的强度就可以对蛋白进行定量。
TMT/iTRAQ标记蛋白质组学实验流程
技术特点
定量精确:每组平行比较多达8个样本,标记效率高达97%,可减少样本处理、以及不同组上机造成的实验误差。
高效率样品分离:进行SCX-HPLC分离,实现自动化操作。
高鉴定率:系统全面地研究组织或细胞中尽可能多的蛋白质,可鉴定多达6000种蛋白。
适用范围广:无物种特异性限制,理论上可用于所有物种。
仪器性能优良:基于高分辨率(大于105)、高质量精度(小于1ppm)质谱平台,可获得更加准确的结果。
信息分析内容
技术流程
样本要求