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过氧化氢酶测定试剂盒

过氧化氢酶测定试剂盒

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产品名称: 过氧化氢酶测定试剂盒

英文名称: Catalase (CAT) Assay Kit

产品编号: BC0200

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三

品牌商标: Solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

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产品内容:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4保存;

试剂一:液体 60mL×1 瓶,4保存;

试剂二:液体 100μL×3 瓶,4保存。

 

产品说明: 

CAT(EC1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的 H2O2清除酶,在活 性氧清除系统中具有重要作用。 H2O2240nm 下有特征吸收峰,CAT 能够分解 H2O2,使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时 间而下降,根据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。

 

操作步骤: 

一、粗酶液提取: 

1、细菌、细胞或组织样品的制备 细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个): 提取液体积(ml)为 500-1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超声波破碎细 菌或细胞(功率 20%200w,超声 3 秒,间隔 10 秒。重复 30 次);8000g4离心 10 分钟,取上 清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 15-10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1mL 取液),进行冰浴匀浆。8000g4离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

二、CAT 测定操作 

1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 240nm 处,蒸馏水调零。

2CAT 检测工作液的配置:用时在每瓶试剂二(100μL)中加入 20ml 试剂一,充分混匀,作为工 作液;用不完的试剂 4保存一周。

3、 测定前将 CAT 检测工作液 37(哺乳动物)或 25(其他物种)水浴 10min

4、 取 1mLCAT 检测工作液于 1mL 石英比色皿中,再加入 35μL 样本,混匀 5s;室温下立即测定 240nm 下的初始吸光值 A1 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA=A1-A2

三、CAT 活性计算:

1、 血清(浆)CAT 活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单

位。CATU/mL)=﹝ΔA×V 反总÷ε×d×109÷V ÷T=678×ΔA

2、 组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算:

1) 按样本蛋白浓度计算: 单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CATU/mgprot)=﹝ΔA×V 反总÷ε×d×109÷V ×Cpr÷T=678×ΔA÷Cpr

2) 按样本鲜重计算: 单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CATU/g 鲜重)=﹝ΔA×V 反总÷ε×d×109÷W×V ÷V 样总)÷T=678×ΔA÷W

 3、 按细菌或细胞中 CAT 活力计算: 单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个 酶活力单位。

CATU/104 cell)=﹝ΔA×V 反总÷ε×d×109÷500×V ÷V 样总)÷T=1.356×ΔA

V 反总:反应体系总体积,1.035×10-3Lε:H2O2摩尔吸光系数,4.36×104L/mol/cmd:比色皿 光径,1cmV 样:加入样本体积,0.035mlV 样总:加入提取液体积,1mlT:反应时间,1minW,样本质量,gCpr:上清液蛋白浓度,mg/ml500:细胞或细菌总数,500 万。

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