HYQCT法植物基因组提取试剂盒-核酸纯化-试剂-生物在线
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HYQCT法植物基因组提取试剂盒

HYQCT法植物基因组提取试剂盒

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产品名称: HYQCT法植物基因组提取试剂盒

英文名称: HYQspinTM CT Plant DNA Kit

产品编号: HG205

产品价格: 0

产品产地: 美国

品牌商标: HYQ

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使用范围: null

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 操作步骤: 
1. 取粉状干燥组织10-50 mg ,放入研钵,加入 500 μL Buffer CH1 ,常温下研磨,研磨至无明显可以肉眼观察到的颗粒状悬浮物,转移至2.0 mL 离心管中。
*可选: 加入 6μLβ-巯基乙醇,瞬时涡旋,确保菌团已分散。
2. 置于65 oC 水浴锅中,水浴15分钟,期间颠倒混匀2次。
*可选: 如果需要去除RNA,在温浴前加入 5 μL RNase A ,室温静置5分钟。
3. 加入 600 μL 氯仿 /异戊醇 (24:1),涡旋混匀,12,000rpm离心10分钟。
4. 小心吸取 300 μL上清至一新的1.5 mL 离心管中,避免吸起沉淀。
5.  加入150 μL Buffer CH2 和 300 μL 无水乙醇,涡旋混匀,加入无水乙醇后可能会形成沉淀,这不影响DNA纯化。
6. 将DNA离心柱插入2.0 mL离心管中,将样品液(包括可能形成的沉淀)加入到离心柱中,10,000rpm离心 1 分钟,倒掉废液,将离心柱重新插入收集管中。
7. 加入 650 μL Buffer DWS(确保已加入无水乙醇),10,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉废液,将离心柱重新插入收集管中。
*Buffer DWS用无水乙醇稀释后使用。
8. 再加入650 μL Buffer DWS,13,000 rpm 离心1 分钟,倒掉废液,将离心柱重新插入收集管中。
9. 13,000 rpm开盖离心5 分钟,开盖离心有助于去除残留乙醇,乙醇的有效去除保证DNA的洗脱,否则影响下游实验。
10.将NDA离心柱插入1.5 mL离心管中,加入 65oC预热的50-200 μL Buffer ES ,静置2分钟,13,000 rpm 离心 1分钟 洗脱DNA。小的洗脱体积增加DNA 浓度但洗脱量少,不建议洗脱体积超过 200 μL 。
11. 再加100 μL Buffer ES洗脱, 第二次洗脱可收获另外20%的DNA
*离心前60℃-70℃温浴5分钟,有利于增加DNA浓度。
基因组DNA的得率会因为样品的种类和质量有所不同, 一般50mg的粉状干燥组织可以得到10-50 μg DNA , A260/A280 比值在1.7-1.9。
Sample
Plant Wet/Dry Tissue
Type
Spin column
Operation
Spin
Application
PCR, Restriction Digestion, and Hybridization techniques
http://www.hyqbio.com.cn/index.php?case=archive&act=show&aid=31