TdT末端转移酶

描述：末端转移酶（TdT）是一种不依赖于模板的 DNA 聚 合酶，催化脱氧核苷酸结合到 DNA 分子的 3’羟基端。带有 突出、凹陷或平滑末端的单双链 DNA 分子均可作为 TdT 的 底物，加尾长度可达 5~300nt。此酶分子量为 58.3 kDa，无 5’和 3’核酸外切酶活性，反应中加入 Co2+可提高加尾效率。 该酶广泛用于 DNA 的 3’末端添加同聚物、利用修饰碱基（如 ddNTP，DIGdUTP）标记 DNA 3’末端、TdT 介导的 dUTP 缺 口末端标记技术（细胞凋亡的原位检测）等试验。该酶经检 测无 DNA 内切酶和外切酶污染，不含 RNase。 组分 名 称 500U 2500U Terminal Transferase (20 U/μl) 25 μl 125 μl 10×TdT Buffer 1 ml 1 ml 10 mM CoCl2 250 μl 250 μl 活性定义：37℃60 分钟内，催化 1nmol dNTP 加入到多聚 核苷酸 3’羟基末端中所需的酶量定义为 1 个活性单位 1×TdT Buffer: 100mM KCl, 30mM Tris-acera, 0.05% (v/v) Triton X-100 (pH 7.5 at 25 °C) 热失活：75°C 20min。 储存：-20℃可保存 3 年。 反应实例 1．配制反应体系 Terminal Transferase (20 U/μl) 2 μl 10×TdT Buffer 5 μl 10 mM CoCl2 5 μl DNA 5 pmol 10 mM dATP（或其它标记物） 0.5 μl ddH2O Up to 50 ul 37°C 孵育 30min。 2. 75°C 20min 失活。 注意事项 1、适量 EDTA 可使 Terminal Transferase 的活性丧失。 2、金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘例 子和磷酸根离子均对 Terminal Transferase 活性具有抑制作 用。

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