HYQ植物基因组提取试剂盒
产品名称: HYQ植物基因组提取试剂盒
英文名称: HYQspinTM Plant DNA Kit
产品编号: HG204
产品价格: 0
产品产地: 美国
品牌商标: HYQ
更新时间: null
使用范围: null
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操作步骤:
1. 取适量植物组织(新鲜组织不超过100mg或干燥组织不超过50mg),放入研钵,加入900 μL Buffer H1,研磨至无明显可以肉眼观察到的颗粒状悬浮物,转移至2.0 mL 离心管中。
可选: 加入 10μLβ-巯基乙醇,瞬时涡旋,确保菌团已分散,可有效提取DNA 。
2. 置于65 oC 水浴锅中,水浴10 分钟(干燥组织可酌情延长时间),期间颠倒混匀几次。可选:如果需要去除RNA,温浴前加入 5 μLRNase A 。
3. 加入140 μL Buffer H2 ,涡旋振荡 10秒混匀,13,000 rpm 离心10分钟。
4. 小心吸取上清至一新的 2.0 mL 离心管中,加入0.5 倍体积的Buffer H3 和0.75 倍体积的无水乙醇 (例如:600 μL 上清 +300 μL H3+450 μL 无水乙醇),涡旋10秒混匀。
5. 将DNA离心柱插入2.0 mL离心管中,将样品液(包括可能形成的沉淀)加入到离心柱中, 13,000 rpm 离心1分钟,倒掉废液,将离心柱重新插入收集管中。
6. 加入650 μL Buffer DWS(确保已加入无水乙醇),13,000 rpm 离心 1分钟,倒掉废液,将离心柱重新插入收集管中。
*Buffer DWS用无水乙醇稀释后使用。
7. 再加入650 μL Buffer DWS,13,000 rpm 离心1 分钟,倒掉废液,将离心柱重新插入收集管中。
8. 13,000 rpm开盖离心5 分钟,开盖离心有助于去除残留乙醇,乙醇的有效去除保证DNA的洗脱,否则影响下游实验。
9. 将NDA离心柱插入1.5 mL离心管中,加入 65oC预热的50-200 μL Buffer ES (或无菌水) ,静置2分钟,13,000 rpm 离心 1分钟 洗脱DNA。小的洗脱体积增加DNA 浓度但洗脱量少,不建议洗脱体积超过 200 μL 。
10. 再加100 μL Buffer ES洗脱, 第二次洗脱可收获另外20%的DNA。
*离心前60℃-70℃温浴5分钟,有利于增加DNA浓度。
基因组DNA的得率会因为样品的种类和质量有所不同, 一般100mg的新鲜组织可以得到10-50 μg DNA , A260/A280 比值在1.7-1.9。
Sample
Plant Tissue
Type
Spin column
Expected yield
The binding capacity per column is 40 μg of DNA
Operation
Spin
Application
PCR, Southern Blotting, and Restriction Digestion