BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受态细胞

产品规格: BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl F – ompT hsdS(rB– mB– ) dcm+ Tetr galλ(DE3) endA Hte [argU proL Camr] [argU ileY leuW Strep/Specr] BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL 菌株来源于 Stratagene 公司的 BL21-Gold 菌株，缺少 Lon 蛋白 酶和 OmpT 蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的 4 种稀有密码子( AGA、AUA、CCC、 CUA) 对应的 tRNA （argU、ileY、proL、leuW），提高外源基因，尤其是富含 AT-或 GC-的真核基 因在原核系统中的表达水平。 该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区（DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶），可同时表达 T7 RNA 聚合酶 和大肠杆菌 RNA 聚合酶，可用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，氯霉素， 链霉素，壮观霉素抗性。High5TM 系列 BL21- Codon Plus(DE3)-RIPL 感受态细胞由特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检 测转化效率高达 108cfu/μg。 1. 取 100μl 冰上融化的  BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL 感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混 匀，冰上静置 25 分钟。2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200rpm 复苏 60 分 钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。 5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。 1.感受态细胞最好在冰上融化。 2. 混入质粒时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。 5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。