产品说明： 

    伊文斯蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，分子式 C 34 H 24 N 6 Na 4 O 14 S 4 ，分子量为 960.80，CAS 号为 314-13-6。

    伊文斯蓝与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞因有外排功能而无法被伊文斯兰染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝 色。因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。

使用说明：

 (一)血脑屏障通透性 

    1、 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射伊文斯蓝染色液，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h 后处死小鼠，取目的脑组织。 

    2、 脑组织置于1.5mL离心管中，加入1mL PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,离心。 

    3、 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室温孵育 24h。 

    4、 离心15min。 

    5、 取上述溶液，用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不同梯度的标准伊文斯蓝的 OD 值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测样品的伊文斯蓝含量。 

(二)活细胞染色 

    1、取 100μL 重悬细胞到离心管内，加入 100μL 伊文斯蓝染色液轻轻混匀染色(染色时间可适当延 长，但不宜超过10min)。 

    2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细 胞样品至少数 500 个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。

    细胞存活率计算公式如下： 细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%

注意事项：

    1、 Evans Blue Stain 对人体有轻微毒性，请小心防护。 

    2、 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 

    3、 血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain 注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。 

    4、 最好采用低温冷冻离心机进行离心。 

    5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。