CCK8细胞毒性实验
产品名称： CCK8细胞毒性实验
英文名称： CCK8
产品编号： HL010
产品价格： 10000-2500元
产品产地： null
品牌商标： null
更新时间： 2023-09-21T16:14:31
使用范围： null
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免疫荧光，激光共聚焦，病毒包装，MTT, Transwell 等单项实验服务，并有能力承接肿瘤，神经等方面的实验课题，帮助客户完成实验构思，操作及英文文章润笔等专项服务
实验咨询专线 13817159308（24小时）
实验咨询邮箱：baisong0727@163.com
实验咨询QQ: 162472051
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实验步骤：
细胞活性检测
1. 在96孔板中加入100μl细胞悬液，将培养板放入细胞培养箱中培养（在37℃，5%CO2的条件下）。
2. 向每孔中加入10μl CCK-8溶液（比例是10:1），同时设置空白对照孔。（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）
3. 放入细胞培养箱中培养0.5-4h，孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度而定，可以设计时间梯度，选择适宜的孵育时间。
4. 用酶标仪在450nm波长处测定光吸收值。
5. 如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
细胞增殖-毒性检测
1． 在96孔板中加入100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5% CO2的条件下）。
2． 向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。
3． 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
4． 每孔加入10μl CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5． 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6． 用酶标仪在450nm波长处测定光吸收值。
7． 如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
活力计算：
细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100
A（加药）：具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0加药）：具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
注意事项：
1. 初次实验前，应对接种细胞数量和孵育时间进行摸索，找出最佳细胞数量和孵育时间。
2. 细胞接种均匀，培养板边孔的水分容易蒸发，因此只加PBS或培养基，以减少实验误差。
3. 检测主要依赖脱氢酶催化反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
4. 如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高