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凝胶迁移实验——EMSA

概述：
    凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析，这以技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

原理：
    通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针，常见EMSA实验设计一般分以下三种：

1、野生型冷探针竞争：野生型冷探针与热探针竞争结合核抽提，从而证明复合物是探针和核蛋白的特异结合产物。

2、突变型冷探针竞争：将探针上的转录因子结合的核心序列突变后，再与野生热探针和核抽提物孵育，该结果可以证明复合物的形成取决于核心序列。

3、Supershift实验：在反应中加入预测转录因子的抗体，由于抗原抗体特异结合，使复合物分子量增大，出现超迁移条带，该结果可以证明复合物中时候含有预测的转录因子。

采用EMSA可以直接验证：
 转录因子与miRNAs启动子的结合（蛋白:DNA复合体）；合体），并调控miRNAs的成熟过程。

EMSA的特殊作用：
 EMSA:Western Blot替代Supershift检测结合蛋白的种类；
 设置不同的探针来判断miRNAs与蛋白的结合序列。

客户提供：目的基因信息，生物素标记探针；
          特异性抗体。

我司提供：EMSA结果图