LAMP恒温扩增试剂盒(OTG可视染料法,冻干制剂)

中文名称：LAMP恒温扩增试剂盒(OTG可视染料法,冻干制剂)
英文名称：Lyophilized LAMP Kit(Visual OTG Dye)
产品规格：48|960T
本试剂盒基于LAMP技术，LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30~60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。本试剂盒为冻干制品，相对于液体型产品更加稳定，灵敏度更高，操作更加方便，通常在30min内完成检测。

Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有很强的链置换活性，以及5’→3’的DNA聚合酶活性，因此可以应用于LAMP实验。该制品内含Bst DNA聚合酶4.0因此既可以扩增DNA，也可以直接扩增RNA分子。

橙绿变色染料OTG(Orange to Green)以冻干的形式预加在8联管盖上。在LAMP反应完毕后（在反应完毕前，务必不能将管盖上染料混入反应液中），将0.2ml EP管颠倒溶解OTG染料后。LAMP的反应产物将与OTG染料形成强烈的绿色肉眼可见变色反应（阳性），而未发生扩增的EP管为深橙色（阴性）。

试剂盒组成：

保存条件：-20℃，有效期一年，可常温运输。

反应实例：
以检测非洲猪瘟病毒（ASFV）为例，以标准质粒为模板，用本试剂盒检测，结果如下图


使用方法：

1．LAMP OTG Reagent为干粉形式，包含Bst DNA聚合酶4.0、dNTP等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.75ml的LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。

2．OTG染料已经预先加入在EP管盖上，为干粉形式，其牢固的结合在管盖上，仅有反应完毕后，将EP管倒置后才能将其溶解，溶解后其将立即终止LAMP反应，并与LAMP反应产物形成鲜亮的绿色可见光。在配制反应液和反应过程中务必不能将EP管盖上的染料混入反应液中，否则会导致LAMP反应终止。

3．配制反应体系
在0.2ml EP反应管中加入下述试剂

全部试剂加入完毕后，轻弹EP管底部后，再盖上含OTG染料的EP管盖（盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖上的OTG染料溶解，OTG染料一旦混入反应液中将会终止LAMP反应）。
首次实验时LAMP Primer Mix分别采用1、1.5、2μl，以阴性不变色，阳性样品正常变色为标准，作为后续测试用量。

4．反应体系配好后，置于60~65℃（首次实验采用60℃）进行反应20~45min（扩增良好的引物组合，通常25min即可变色，一般不超过45min，首次实验设置20、25、30、45min）。

5．观察结果：观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，以防止污染操作台。将反应EP管倒置，并手腕轻甩，反应液浸泡EP管盖上的OTG染料，静置30s。再将EP反应管正置，并轻甩反应液到EP管底部，此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色，而阴性未发生扩增的管将为深橙色。（在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染）。一旦发生气溶胶污染，请使用DNA污染去除剂进行环境清理。

LAMP实验的条件优化
1．LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为8μM、F3/B3分别为2μM。
2．四个重要的参数，将对成功建立LAMP检测方法至关重要，分别是引物位置、引物使用浓度、反应温度、反应时间。引物使用浓度、反应温度、反应时间是优先要确认的参数，如经过参数调整后仍不能达到检测用标准，则重新设计引物组合，再进行测试。

不同显色方法的LAMP试剂盒的比较：

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！