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生物制药N端测序

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产品名称：生物制药N端测序

英文名称： N-duancexu

产品编号： 19428

产品价格：询价

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更新时间： 2023-08-17T09:29:11

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北京百泰派克生物科技有限公司

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百泰派克生物科技 - 您身边的生物质谱专家

北京百泰派克生物科技有限公司(Beiing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd.简称BTP)从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质(包括蛋白质、多肽、代谢物)质谱分析以及小分子物质检测服务。公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务，业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等。7大质量控制检测平台，服务3000+企业，10000+客户的选择，致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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Edman降解（埃德曼降解）法，是由菲尔•埃德曼（Pehr Edman）首先创立用于肽链或蛋白质中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman降解法检测的原理非常简单，在碱性条件下反应，用异硫氰酸苯酯（Phenylisothiocyanate, PITC）与待检测的蛋白质（多肽）的N-端氨基生成苯氨基硫甲酰（PTC）的衍生物，然后处理-关环-选择性切断肽链N-端，得到N-端氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂萃取衍生物，在酸的作用下，不稳定的衍生物转变为稳定的的乙内苯酰硫脲（PTH）衍生物，余下肽链中的酰胺键不受影响。通过用HPLC或电泳法分析生成的乙内酰苯硫脲氨基酸（PTH-氨基酸），可以鉴定出氨基酸类别。重复氨基酸鉴定反应可以达到对N端氨基酸按照从N端到C端的方向依次对氨基酸序列进行分析。对于序列较长的蛋白质（多肽），还可以将样品先切成小的肽段，先对肽段序列分析，再将肽段信息进行拼接即可获得完整蛋白质的序列信息。

蛋白质N端测序流程

Edman降解法用于N端测序的优点：

1. PITC与所有氨基酸残基的反应产率和回收率高，因此副产物少，可通过色谱进行准确鉴定；

2. 反应时间快，对于大多数氨基酸残基来说，30min耦合时间，5min切割反应时间即可；

3. 反应后的肽链仍然是完整的，可用Edman降解法重复测定新生的N末端氨基酸。

Edman降解法用于N端测序需要注意的问题：

1. 样品纯度需>90%，盐离子含量在50 mmol/L之内，不含SDS等变性剂，N端必须是均一的高纯样品；

2. 10 Pmol 样品可以测定20 aa；

3. 液体样品不能含有蛋白酶，建议尽早测试，防止时间太长容易降解；

4. 转膜样品在转膜前不宜放置太久以防样品扩散，转膜后可密封保存3-6个月，建议使用Coomassie R-250进行染色，电泳缓存液建议使用CAPS buffer；

5. 样品无信号峰是，建议蛋白进行N-端封闭；

6. 建议整个反应过程中尽可能使用高纯buffer。

案例分析：

百泰派克生物科技采用岛津公司推出的PPSQ系列仪器实现对蛋白或者多肽样品N端氨基酸序列的分析，可以分析N端30个以上的氨基酸。以下是我们对某一蛋白药物进行分析的实际色谱结果，该项目对样品中蛋白药物的前15个氨基酸进行了分析。从下图（第15个氨基酸的色谱图）可以看出，色谱峰值仍然非常高，可以得到非常准确的结果。