2xHi SYBR Green qPCR Mix（化学修饰热启动）

描 述 ： 本制品是采用 SYBR Green 嵌 合 荧 光 法 进 行 Real-Time PCR 的专用试剂，本 SYBR Green qPCR Mix 将化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP、 SYBR Green 染料等试剂预混在一起，是一种 2×浓度的单 组分预混试剂，进行实验时，PCR 反应液的配制十分方便简 单，只需加入引物、模板、水即可。 制品中的 DNA 聚合酶为化学法修饰的 Hot Start Taq DNA 聚合酶，该酶在 50℃以下 100%无活性，只有 95 度条 件下加热 15min 后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以 有效抑制非特异性 PCR 扩增，极大的提高了 PCR 扩增特异 性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的 扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。 该制品配有单独的 ROX 内参染料，使得该试剂可应用 于所有 RealTime PCR 机型，包括：ABI 7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)；LightCycler (Roche Diagnostics)； Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad&MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。 包装 规 格 2×Hi SYBR Green qPCR Mix 50×ROX Dye 1ml （A2201A） 1 ml 200 μl 5ml （A2201B） 1 ml×5 200 μl 储存： (1) 长期保存，请避光置于-20℃或-70℃可保存３年。 (2) 经常使用，融化后可置于 4℃，可保存 1 年。 注：长期-20℃保存可能会出现沉淀，室温融化后混合均匀， 不影响试剂性能。 操作方法 1. 根据机型选择步骤 A 或 B A: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time PCR 仪，包括：ABI PRISM7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)等。按照如下组分配 制 20 μl PCR 反应体系： 终浓度 2×Hi SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1× 50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1× PCR Forward Primer(10 μM) 0.4~0.8 μl 0.2~0.4 μM PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4~0.8 μl 0.2~0.4 μM DNA 模板 0.5~2 μl ddH2O Up to 20 μl B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time PCR 仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)； MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。按 照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系： 终浓度 2×Hi SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1× PCR Forward Primer(10 μM) 0.4~0.8 μl 0.2~0.4 μM PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4~0.8 μl 0.2~0.4 μM DNA 模板 0.5~2 μl ddH2O Up to 20 μl 2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下： Stage 1: 95℃ 15min* Stage 2: 95℃ 10s 60℃ 30s 35~40 cycles Stage 3: Dissociation analysis 注意：由于该酶为化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶，必须于 95℃加热 15min 才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短时间。 3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线、融解曲线 和标准曲线。

2×Hi SYBR Green qPCR Mix是采用SYBR Green 嵌合荧光法进行 Real-Time PCR的专用试剂, 将化学修饰的热启动Taq DNA 聚合酶、反应Buffer、dNTP、SYBR Green染料等试剂预混在一起，是一种2X浓度的单组分预混试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、模板、水即可。 2×Hi SYBR Green qPCR Mix中的DNA聚合酶为化学法修饰的Hot Start Taq DNA 聚合酶，该酶在50℃以下100%无活性，只有95℃条件下加热15min后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性PCR扩增，极大的提高了PCR扩增特异性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。 该制品配有单独的ROX内参染料，使得该试剂可应用于所有RealTime PCR 机型，包括：ABI 7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)；LightCycler (Roche Diagnostics) ；Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad&MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。

组分

包装 2×Hi SYBR Green qPCR Mix 50×ROX Reference Dye 100T×20 μl（A2201A） 1 ml 200 μl 500T×20 μl（A2201B） 1 ml×5 200 μl

主要特征

热启动酶采用化学修饰，100%热启动 单组份预混液，使用方便快捷 高特异性，有效抑制非特异性扩增 高灵敏度，可检测低丰度基因 适用于所有实时定量PCR仪器

应用

RNA和microRNA的相对定量检测。

注意事项

1. 2×Hi SYBR Green qPCR Mix于-20℃保存时容易形成沉淀，可用手轻握或室温放置一段时间后，颠倒混匀待其完全融解后使用。 2. 本制品请避光保存(短期6个月内使用可置于4℃)，使用频率低时置于-20℃，反复冻融会使制品性能下降。 3.配制反应液时，注意避免强光照射，并于冰上操作。

储存

请避光置于-20℃或-70℃可保存３年。 注：长期-20℃保存可能会出现沉淀，室温融化后混合均匀，不影响试剂性能。

反应实例

Fig. A-C 为使用SYBR Green法检测 10～107 copy模板的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。D.重复性高，误差 <±0.5Ct。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！