过表达腺病毒构建与包装-分子生物学服务 -技术服务-生物在线
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过表达腺病毒构建与包装

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产品名称: 过表达腺病毒构建与包装

英文名称: 过表达腺病毒构建与包装

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 生博主要提供以慢病毒、腺病毒为主的应用于临床前细胞学实验和整体动物实验的针对不同基因和药物靶标的各种即用型病毒颗粒。

      腺病毒(Adenovirus,AdV)是一种非整合型双链DNA病毒,在自然界中广泛分布。尽管一些类型的腺病毒会引起人胃肠道、呼吸系统或眼部的急性感染,但是应用于基因治疗研究的腺病毒是安全的,对人无致病、致畸、致癌的潜在危害。腺病毒颗粒没有包膜的直径为70~90nm的颗粒,由252个壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7~9nm。衣壳里是线状双链DNA分子,约含35 000 bp,两端各有长约100 bp的反向重复序列。据Journal of Gene Medicine的统计,截至2006年,在全球1192项基因治疗临床试验方案中,有305项(26%)使用腺病毒载体,首次超过反转录病毒,居第一位。由于腺病毒可以感染呼吸道和消化道,所以它所介导的基因治疗不仅可以静脉注射,还可以通过口服经肠道吸收或通过喷雾、滴注经呼吸道吸收,使得基因治疗易于推广应用。腺病毒易于制备、纯化和浓缩,病毒滴度可以高达1011pfu/ml,比反转录病毒高出10000倍以上。所以,它介导的基因治疗常采用in vivo的方式进行,是目前基因治疗临床试验中应用最多的一种载体。

腺病毒载体有下列优点:
(1)腺病毒的基因结构与功能研究的比较清楚;
(2)可装入基因的容量较大;
(3)转染范围广,转染率较高,所有腺病毒载体均有转染分裂期和非分裂期细胞的能力;
(4)不整合到靶细胞基因组,无插入突变,无致癌性,对人无致病、致畸、致癌的潜在危害;
(5)可以复制出滴度高(可以达到1011VP/ml)、稳定性好、基因转移效率高的病毒;
(6)可以在肠道、呼吸道繁殖,具有口服活疫苗的发展前景;
(7)很容易进行临床应用规模的商业化生产,其病毒储藏及运送条件均十分清楚;

      腺病毒载体的缺点主要是运输的基因不能持续表达,通常只表达5-20天,以及易引起局部组织炎症反应和机体免疫反应,针对这一缺憾,上海生博在Adeasy、AdMax等腺病毒系统的基础上,经过不断的改进与优化,建立了一套成熟的腺病毒包装系统,已解决各类科研用户的不同需求。该系统是以复制缺陷型腺病毒DNA为骨架构建成的重组腺病毒系统,在穿梭载体、病毒骨架载体及包装细胞系等方面有很大优势,出毒快捷、滴度高、包装可靠!

 

生博提供:
      重组慢/腺病毒载体构建服务,包括插入目的基因使其过表达,或者插入shRNA片断达到目的基因RNAi的效果;同时可以根据客户的需要,可在重组慢/腺病毒载体中加入各种报告基因或标签;并可构建可调控表达的重组腺病毒载体。重组慢/腺病毒扩增及纯化,超大量及超高滴度的扩增及纯化病毒滴度高,纯化后可以达到2×1010- 1×1012   pfu/ml(腺病毒),2×108- 2×10  pfu/ml(慢病毒)体积在1-2ml左右,可以满足细胞水平研究所需病毒量和满足瘤内注射需要量不同规格病毒扩增。

 

服务流程图

 

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实验流程图

实验结果

        病毒包装成功后,通过RT-PCR或 Western Blot鉴定结果,根据客户需求量提供相应量的病毒,并对扩增、纯化的病毒同样进行qPCR或 Western Blot鉴定,同时检测滴度。并给客户提供qPCR结果、Western Blot结果及滴度结果。

 

报价与周期

 

 

参考文献

 

[1] Umana P , Gerdes CA , Stone D , et al . Efficient FLPe recombinase enables scalable production of helper - dependent adenoviral vectors with negligible helper - virus contamination. Nat Biotechnol ,2001 ,19(6) :582 - 585.
[2] Cheshenko N , Krougliak N , Eisensmith RC , et al . A novel systemfor the production of fully deleted adenovirus vectors that does not require helper adenovirus[J ] . Gene Ther ,2001 ,8(11) :846 - 854.
[3] Sakhuja K, Reddy PS , Ganesh S , et al . Optimization of the generation and propagation of gutless adenoviral vectors [J ] . Hum Gene Ther,2003 ,14(3) :243 - 254.
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