Cast PCR(基于Taqman探针法的体细胞突变检测方法)

在癌组织中，与野生型DNA序列的高含量相比，体细胞突变往往只是微乎其微的量。在这样一个大量野生型等位基因存在的背景下检测这些稀有突变是相当具有挑战性的。现有的突变检测方法往往在灵敏度和特异性上受到很大限制，从而影响了癌组织中体细胞突变的检出率。基于TaqMan®技术的Cast PCR检测方法旨在解决这些限制，并且提供一个能够准确得量化肿瘤样品中特定基因位点突变率的方法。

Cast PCR的全称是竞争性等位基因特异的TaqMan聚合酶链式反应（competitive allele-specific TaqMan® polymerase chain reaction）。这是一种新颖的技术，它在扩增目的突变的同时，利用抑制因子来沉默样品中野生型等位基因的扩增。再加上Life Tech金标准的TaqMan探针和引物，从而实现了较高的灵敏度和特异性。因此Cast PCR可以用于从肿瘤细胞的DNA样本中筛选出极微量的突变基因。

Cast PCR的特点：

1. 高特异性 – 突变等位基因的检测是基于等位基因特异的引物，而野生型背景由MGB探针阻断剂寡核苷酸所抑制

2. 高灵敏度 – 可从高达100万个拷贝的野生型gDNA分子中检测出1-5个拷贝的突变分子。

3. 较广的动态范围和出色的PCR效率 – 动态范围高达7个对数期，而PCR平均效率为100 ± 10%

4. 样品类型兼容性好 – 您提供给我们的样品可以是石蜡样品、细胞、组织、血液甚至cfDNA。

突变分析可以根据实验需要选择以下两种方法：

1）定性分析：突变等位基因分析结合基因参考分析。这种方法使用最少的孔、样本和试剂，能够确定样品中突变碱基存在与否。

2）定量分析：突变等位基因分析结合野生型等位基因分析。这种方法能够高度准确地定量样品中的突变比例。

杏园的服务范围：

1.             DNA水平：杏园采用高通量测序、基因突变PCR芯片和sanger测序技术平台可以一次性检测人的全外显子组的基因突变或者插入缺失情况，也可以一次性检测几十个基因或者位点的突变、插入、缺失及拷贝数变化情况；

2.             RNA水平：杏园采用基因表达PCR芯片、转录组测序技术平台，可以一次性检测人的全转录组水平基因表达、融合、突变情况，也可以通过Real Time PCR一次性检测几个、几十甚至几百个基因的表达情况；

3.             蛋白质水平：杏园采用抗体芯片技术，可以一次性检测几十甚至几百个蛋白的表达。也可以通过WB或者ELISA检测单个蛋白的表达水平。

4.             生物信息学分析：生物芯片和高通量测序数据的深入挖掘。

杏园的技术平台

1.         高通量测序平台：可以进行外显子组测序、转录组测序和靶向捕获测序（即仅仅检测部分基因部分位点）

2.         基因芯片平台：采用PCR芯片技术，杏园可以检测基因突变、基因拷贝数变化和基因表达变化

3.         蛋白芯片平台：采用抗体芯片技术，杏园可以检测样品中蛋白表达变化、蛋白磷酸化水平和蛋白质相互作用

4.         Real Time PCR平台：每一个引物杏园都经过核酸分析仪的分析。确保了引物特异性。

5.         WB实验平台：杏园采用专业化学发光成像系统，相比较传统的压片法，结果更加可靠。

为什么选择杏园？

1.         GMP/GLP标准的分子生物学实验室：高标准的实验室建设可以避免各种污染，从基础上保证杏园的实验结果的可靠性；

2.          一流的实验室管理方法：公司引入了精益六西格玛（Lean-Six Sigma）管理方法，在有着丰富管理与实践经验的黑带大师（Master Black Belt）亲自指导下，严格执行ISO质控标准体系，逐环节细致实施标准操作规范，全过程监控实验的每一步骤，不断优化生产、服务流程，确保快速、准确、高质、稳定地为每一位客户提供服务优质、可靠而且真实的实验报告

3.         强大的技术支持团队：中科院技术专家带领的技术团队保证杏园可以带领客户走在科研的前沿。

4.         强大的生物信息学能力：中科院生物信息学高通量筛选领域专家领导的生物信息学团队为客户高通量筛选结果提供高质量的生物信息学分析数据。

5.         一流的实验设备：我司配备的PCR仪器，核酸分析仪以及杏园的高通量测序设备全部都是国际上被深度认可的一流设备，保证了杏园客户实验的质量和稳定性；

6.         贴心的技术服务：杏园十分注重客户体验，以实验真实性准确性为基础，以客户满意为最终标准，保证了客户满意度。