产品内容：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：冰乙酸4℃保存。（自备）

试剂二：液体35 mL×1瓶， 4℃保存。

试剂三：甲苯4℃保存。（自备）

标准品：粉剂×1支，脯氨酸10mg，4℃保存。

产品说明：

脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。 

用磺基水杨酸（SA）提取Pro，加热处理后，Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加甲苯萃取后，在520nm测定吸光度。

实验需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、冰乙酸、甲苯、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品测定的准备 

1、细胞、细菌或组织样品的制备 ： 

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每100万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），之后置沸水浴振荡提取10min；10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

2、血清（浆）样品：取100μL血清（浆）加入0.9mL提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

3、标准品的处理：称取1mg，将标准品稀释为15、10、8、6、4、2、1、0 μg/mL。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至520nm，甲苯调零。

2、取0.5mL上清液（或稀释后的标准品）+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二于有盖试管中，置沸水浴中保温30min（盖紧，防止水分散失），每10min振荡一次。

3、待冷却后，在试管中加入1mL试剂三，振荡30s，静置片刻，使色素转至试剂三中；吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中，于520nm波长处比色，记录吸光值。

4、根据标准品吸光值和浓度，建立标准曲线。

三、Pro含量计算：

1、通过标准曲线计算样品脯氨酸含量(y为脯氨酸含量，μg/mL；x为OD值)

2、按照细菌、细胞个数或者组织鲜重计算，首先根据标准曲线求得y值：

细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/10⁴ cell)= y÷细胞浓度(10⁴ cell/mL)

Pro含量(μg/g mass) =y÷样本鲜重(g/mL)

3、血清（浆）中脯氨酸含量，首先根据标准曲线求得y值：

Pro含量[μg/mL血清（浆）] = y÷0.1mL血清（浆）/mL

注意：提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。

 相关文献：

《Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton》 作者:Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,Yanyan Li,Peilin Wang,Yuan Wang,Guoqing Sun,Yongping Cai,Shou-Yi Chen,Yi Lin,Rui Zhang,Sandui Guo 期刊:Environmental and Experimental Botany 影响因子:3.712 PMID:
《A C2H2 zinc-finger protein OsZFP213 interacts with OsMAPK3 to enhance salt tolerance in rice》 作者:Zeyong Zhang,Huanhuan Liu,Ce Sun,Qibin Ma,Huaiyu Bu,Kang Chong,Yunyuan Xu 期刊:Journal of Plant Physiology 影响因子:2.825 PMID:30055519
《Physiological and transcriptomic analysis revealed the involvement of crucial factors in heat stress response of Rhododendron hainanense》 作者:Ying Zhao,Wengang Yu,Xiangyu Hu,Youhai Shi,Yu Liu,Yunfang Zhong,Peng Wang,Shuya Deng,Jun Niu,Xudong Yu 期刊:Gene 影响因子:2.638 PMID:29604462