ER2566感受态细胞

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1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌ER2566感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。是NEB公司开发的具有超高转化效率的蛋白表达原核菌株，能够有效抑制表达的异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。

基因型：F-λ-fhuA2[lon]ompTlacZ::T7genegalsulA11Δ(mcrC-mrr)114::IS10R(mcr-73::miniTn10-TetS)2R(zgb-210::Tn10)

(TetS)endA1[dcm]

特点：1．Lac启动子启动下游T7RNA聚合酶的表达，可用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达。2．fhuA2赋予ER2566菌株对噬菌体T1的抗性。3．lon和ompT蛋白酶缺陷菌株，能够有效防止表达的异源目的蛋白在细菌体内的降解。4．Δ(mcrC-mrr)114，mcr-73突变的存在使ER2566菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的转化效率。pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。

3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。

4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．刚化冻的细胞转化效率最高，避免反复化冻。

2．质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。

*本试剂仅供实验室研究使用