免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光是生物学中经常用到的三种应用,他们的英文名分别是Immunohistochemistry (IHC),Immunocytochemistry (ICC) 和Immunofluorescence (IF)。对于实验室新手来说可能是很容易搞混的,即便是技术大拿们可能在写英文文献的时候也会不小心用错,因为这三个应用确实有些相似,那么下面就随小编一起来看一下他们到底区别在哪里吧。
词根意义:
Immuno-指的是免疫技术 (例如,抗体和抗原的结合)
Histo-指的是组织(细胞以及它周围的细胞外基质)
Cyto-指的是细胞(不包含细胞外的基质)
Chemistry-在这里指的是化学检测方法(例如,颜色的变化)
Fluorescence-对被激发的荧光团的检测
对于这三个应用,有一个部分大家肯定不会搞混的就是“免疫-”,因为这三个应用都涉及到使用抗体,问题出在当你使用荧光剂来标记一抗或者使用荧光标记二抗的时候。IHC和ICC应用用中文来看很好区分,一个应用的样本类型是组织(IHC),另一个样本类型是细胞(ICC),可是一旦使用了荧光标记,大家似乎就有点不知道该用哪个了,因为免疫荧光指的就是使用了荧光标记,这时就很容易只写一个IF,而不去写明到底是组织(IHC)还是细胞(ICC)。这也是为什么小编个人不太喜欢用免疫荧光(IF)来作为一个应用命名的原因,因为免疫荧光不能提供给你足够的信息,只是告诉读者你用了荧光剂,可是这个一抗到底是用在组织上的还是细胞上的呢?所以小编认为,应用了荧光剂的IHC和ICC应该更名为IHF和ICF分别意为Immunohistofluorescence(免疫组织荧光)和Immunocytofluorescence(免疫细胞荧光),虽然这两个词汇在英文文献中应用的还不是很广泛,但绝对不是小编自己杜撰的哦,已经有些学者在使用了,规范化应该也只是时间的问题,现在来看几幅图片更好的区分他们吧!
先不看答案,你能看出这些分别是什么应用吗?
A. IHC (免疫组织化学) 使用小鼠抗HCN1单克隆抗体 (SMC-304) 对小鼠小脑的免疫组化分析. 固定: 室温下10% 福尔马林溶液处理 12-24小时. 一抗: 小鼠抗HCN1单克隆抗体, 1:1000, 室温下孵育1小时. 二抗: HRP/DAB 检测系统:生物素偶联的山羊抗小鼠, 链霉亲和素过氧化物酶, DAB 色原 (棕色), 室温下孵育30分钟. 复染色: Mayer氏苏木素 (紫色/蓝色) 细胞核染色, 250-500uL, 室温下5分钟.
B. ICC(免疫细胞化学)使用小鼠抗Hsp70单克隆抗体 (SMC-100) 对小鼠热休克的黑素瘤细胞的免疫细胞化学分析. 固定: 福尔马林. 一抗: 小鼠抗Hsp70单克隆抗体, 1:1000, 室温下隔夜孵育. 二抗: Biotin 山羊抗小鼠. 图片来自: Dr. Ewa Malusecka, Maria Sklodowska-Curie Memorial Cancer Ceter and Inst. Of Oncology, Poland.
C. IHF (免疫组织荧光) 使用小鼠抗Neuroligin 4单克隆抗体 (SMC-469) 对小鼠齿状回的免疫组织荧光分析. 固定: 甲醛固定石蜡包埋. 一抗: 小鼠抗Neuroligin 4单克隆抗体, 1:100. 二抗: FITC 山羊抗小鼠 (绿色). 复染色: DAPI (蓝色) 细胞核染色, 1:1000. 图片来自: Rachel Reith, NIH/NIMH.
D. ICF (免疫细胞荧光) 使用小鼠抗HO-1单克隆抗体 (SMC-131) 对人HeLa Cells的免疫细胞荧光分析. 固定: 室温下2% 甲醛处理20分钟. 一抗: 小鼠抗HO-1单克隆抗体, 1:100, 4℃下孵育12小时. 二抗: FITC 山羊抗小鼠 (